2001 Fiscal Year Annual Research Report
ODFで誘導される転写制御因子の破骨細胞形成・活性化のシグナル伝達における役割
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13671942
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| Research Institution | 佐賀医科大学 |
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Principal Investigator |
久木田 明子 佐賀医科大学, 医学部, 助教授 (30153266)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久木田 敏夫 九州大学, 大学院・歯学研究院, 助教授 (70150464)
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| Keywords | 破骨細胞 / 転写因子 / 分化 |
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| Research Abstract |
Osteoclast zinc finger gene(OCZF)は筆者らが破骨細胞のcDNAライブラリーから単離した遺伝子がコードするPOZ-Znフィンガー型転写因子である。
(1)OCZFの転写促進活性の解析 OCZFの転写活性について、NFkappaBの結合配列を有するレポータープラスミドを用いて転写活性を測定した。OCZFはこの転写活性を強力に促進したが、ゲルシフトアッセイの結果、OCZFによるDNA結合活性の増強は見られなかった。OCZFはこのレポータープラスミド中の結合配列の特殊な配列を認識し転写活性を上昇させることが考えられ、現在解析中である。ODFの下流には細胞周期に関わる因子であるcyclin-dependent kinase(CDK)インヒビター遺伝子p21が発現誘導されることが報告されている。そこで次に、p21,p27等のプロモーターを有するレポータープラスミドを用いてLuciferase assayにより、OCZFのこれらの転写への影響を調べた。OCZFはこれら遺伝子の転写を強力に促進することを見出した。さらにこれらのプロモーターのdeletion mutantを用い、OCZFの転写活性に関与するプロモーター領域に関して解析を行った。
(2)OCZFの発現解析 RANKLの添加により破骨細胞に分化するマウスマクロファージ細胞株RAW264.7のサブクローンRAW-Dを用いて、OCZFに対するポリクローナル抗体を用いたimmunostainingにより、OCZF蛋白質の発現について調べた。OCZFは、単核の細胞では核の一部分に局在するが、分化した多核の破骨細胞においては細胞質と核の両方に高い発現があることがわかった。さらに、OCZFのPOZdomainをプローブとして用いて、in situ hybridization法を用いて発現の解析を行った結果、関節炎のラット組織中の破骨細胞において特異的に発現することが確かめられた。OCZFは、筋肉や他の組織においては高い発現はみられなかった。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] M.Komine: "Tumor necrosis factor-α cooperates with receptor activator of nuclear factor KB ligand in generation of asteoclasts in stromae coll-depleted rat bone marrow coll culture"Bone. 28・5. 474-483 (2001)
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[Publications] T.Kukita: "Osteoclast differentiation antigen, distinct from receptor activator of nuclear factor kappa B, isinvolvod in osteoclastogenesis under calcitonin-regulated conditions"Journal of Endocrinology. 170. 175-183 (2001)
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[Publications] T.Kukita: "Katl-antigen areliable immunological marker for identifying osteodast precursors of rats : detection of subpopulations a mong precursors and initiation of osteoclastogeresis"Histochem Cell Biol. 115. 215-222 (2001)
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[Publications] T.Kukita: "The new aspect of calcitonin escape the nomenorv : apcssikle inuuivement of asteoclast differentiation antigen in the regulation of osteoclastogenesis and function of caluitonein receptor"Recent Resecnch Developments in Endocrinology/Transworld Research Network. (in press). (2001)
