歯周病におけるカルプロテクチンを介した生体防御機構の解明

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13672188
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 木戸 淳一 徳島大学, 歯学部, 助教授 (10195315)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 片岡 正俊 徳島大学, 歯学部・附属病院, 講師 (20224438)
• Keywords: カルプロテクチン / 歯周病原細菌 / Lipopolysaccharide / 好中球 / 歯周病

Research Abstract

歯周病における白血球由来カルプロテクチン(CPT)の制御機構を解明するために,歯周病原菌由来lipopolysaccharide(LPS)が好中球のCPT遺伝子発現および同蛋白の分泌に及ぼす影響について検討を行った。好中球をP. gingivalis由来LPS(P-LPS)により処理し,全RNAを分離した。RT-PCR法を用いてCPTのサブユニットであるMRP8と同14のmRNAの発現を調べた。その結果,P-LPSによるMRP8/14の両mRNA発現への影響は認められなかった。
一方,P-LPS刺激後の好中球の培養上清中のCPT量を抗CPT抗体によるELISA法で測定した結果、P-LPSによる30分間の処理でCPTの分泌増加が認められた。また,この分泌促進効果はP-LPS濃度依存性(0.1-1000ng/ml)を示し,1000ng/ml P-LPSでは約16倍の分泌促進が見られた。このP-LPSの効果をA. actionmycetemcomitans, P. intermedia, F. nucleatumなどの他の歯周病原菌のLPSと比較したところP. i菌とF. n菌のLPSはP-LPSと同程度の分必促進作用を示したが,A. a菌由来LPSは軽度な促進しか示さなかった(対照群の約4倍)。そこで,LPSによるCPTの分必促進機構を検討するためにLPSのsignal transuductionへの関与が知られているCD14,Toll-like receptor(TLR)2&4の各抗体およびNF-кB阻害剤を用いて,P-LPS誘発性CPT分泌に及ぼす影響を調べた。その結果,抗CD14抗体および抗TLR2抗体により有意な分泌促進阻害が見られた。また,PDTC, NACとDexのNF-кB阻害剤によりNF-кBの核蛋白への結合阻害(ゲルシフトアッサイ法で分析)とCPTの分泌促進阻害が認められた。
以上の結果から,P. gingivalisを含むいくつかの歯周病原菌由来LPSは好中球からのCPT分泌を促進することが明らかとなった。また,このLPSによるCPT分泌促進機構には,LPSのsignal pathwayで知られているCD14,TLRとNF-кBの関与が示唆された。