2001 Fiscal Year Annual Research Report
福山型筋ジストロフィーの分子遺伝学的解析と遺伝子産物フクチンの機能解明
| Project/Area Number |
13672376
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
小林 千浩 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (90324780)
|
|---|
| Keywords | 福山型筋ジス / フクチン / 抗体 / レトロトランスポゾン / ノックインマウス |
|---|
| Research Abstract |
合成ペプチド、融合蛋白を抗原に抗フクチン特異抗体を作成中である。合成ペプチドはヒトとマウス間であまり保存されていない領域に作成、融合蛋白は大腸菌と昆虫細胞を用いて作成した。融合蛋白は不溶性であったので可溶化条件を検討したが、適当な条件が見つからず、不溶性のまま、あるいは、電気泳動ゲルから切り出して抗原とした。また免疫する動物をウサギ、マウス以外に、ニワトリ、ヤギを用いた。現在免疫中のものもあるが、今までに得られている抗血清について、抗原との反応を検討したところ、すべての抗血清が反応することがわかった。さらに動物細胞に強制発現させたフクチンとの反応性を検討したところ、いくつか反応するものが得られていることがわかった。それらについて抗原親和性精製を行った。これら抗体の中に内在性のフクチンを認識するものがあるかどうか検討作業中であるが、内在性フクチンを見るための条件検討がかなり必要であることがわかりつつある。いい抗体が得られた際、ヒト、マウス材料にて、脳、骨格筋など各組織におけるフクチンの局在を胎生期から成人まで各段階を追って免疫組織化学で追求することを予定している。
FCMD患者において、随時遺伝子変異を検索している。フクチンの量的変動と臨床病型/重症度との関連を抗体を用いて検討することを考えている。
3'非翻訳領域にレトロトランスポゾンを組み込んだノックインマウスの作成に向け、ベクターを構築中である。フクチンの3'非翻訳領域は約7kbと長く、またレトロトランスポゾン挿入時に約10kbに達するので、ベクター取り扱いに困難をきたしているが、完成間近である。次にES細胞に導入する予定である。
|
Research Products
(6 results)
-
[Publications] Kobayashi K: "Structural organization, complete genomic sequences, and mutational analyses of the Fukuyama-type congenital muscular dystrophy gene, fukutin"FEBS Letters. 489. 192-196 (2001)
-
[Publications] Kobayashi K., et al.: "Muscular dystrophy and neuronal migration disorder caused by mutations in a novel glycosyltransferase, POMGnTl"Developmental Cell. 1. 717-724 (2001)
-
[Publications] Toda T: "Molecular genetics of Fukuyama CMD and fukutin"Acta Myologica. 20. 92-95 (2001)
-
[Publications] Momose Y: "Association studies of multiple candidate genes for Parkinson's disease using single nucleotide polymorphisms"Annals of Neurology. 51. 133-136 (2002)
-
[Publications] Kano H: "Deficiency of a-dystroglycan in muscle-eye-brain disease"Biochemical and Biophysical Research Communications. 291. 1283-1286 (2002)
-
[Publications] Tachikawa M: "Identification of CAG repeat-containing genes expressed in human brain as candidate genes for autosomal dominant spinocerebellar ataxias and other neurodegenerative diseases"Journal of Human Genetics. (in press).
