2002 Fiscal Year Annual Research Report
生物発光検出法を用いる超高感度多成分同時検出酵素イムノアッセイの開発
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13672431
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
伊藤 克敏 昭和大学, 薬学部, 講師 (20223141)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
前田 昌子 昭和大学, 薬学部, 教授 (00053869)
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| Keywords | 生物発光 / アセテートキナーゼ / ピルベートフォスフェートジキナーゼ / ADP依存性ヘキソキナーゼ / 高感度同時検出 / 生物発光イムノアッセイ / ホタルルシフェラーゼ / ルシフェリン |
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| Research Abstract |
本申請ではアセテートキナーゼ(AK)とピルベートフォスフェートジキナーゼ(PPDK)が同一反応条件下で異なった基質からATPを生成する性質を利用した両酵素の高感度同時生物発光測定法の検討を行った.本法によるAK活性の測定は共存するPPDKの影響はみられず最小検出感度1.03x10^<-20>mol/assay(blank+3SD)であり単独測定と同等の感度が得られた.また,その同時再現性は4.1〜5.2%(CV%,N=8)であった.一方PPDK活性の測定において,ADP-HK及びグルコースの添加により測定中の過剰なAKの基質であるADPを消去し,PPDK測定時のAKによる影響を排除できた.本法によるPPDK活性の最小検出感度は2.05x10^<-20>mol/assay(blank+3SD)であり単独測定と同等の感度が得られた.また,その同時再現性は1.6〜5.7%(CV%,n=8)と良好であった.
今年度は以下の成果を得た.
C-peptideとInsulinをモデル化合物とし,双方ともサンドイッチ法による2成分同時BL-EIAを行った.C-peptideは最小検出感度2.98x10^<-16>mol/assayで同時再現性は6.7%以下(n=8),Insulinは最小検出感度9.93x10^<-17>mol/assay,同時再現性5.7%以下(n=8)と良好な結果を得た.また昭和大学病院中央検査部より恵与された検体を本法により測定した.得られた値の相関係数はC-peptide ; r=0.922(n=42),Insulin ; r=0.947(n=28)と日常分析法とそれぞれ良好な相関が見られた.
次年度は本検出方を競合方とサンドイッチ法を組み合わせた高感度2成分同時検出生物発光イムノアッセイに応用を行う.
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[Publications] Katsutoshi ITO, et al.: "Development of Bioluminescent Assay for Pyruvate Phosphate Dikinase and Its Application to Bioluminescent Enzyme Immunoassay"BIOLUMINESCENCE and CHEMILUMINESCENCE. 353-356 (2001)
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[Publications] Katsutoshi ITO, et al.: "Development of simultaneous bioluminescent assay of acetate kinase and pyruvate phosphate dikinase using firefly luciferase-luciferin reaction"BIOLUMINESCENCE and CHEMILUMINESCENCE. 453-456 (2002)
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[Publications] Katsutoshi ITO, et al.: "Highly Sensitive Simultaneous Bioluminescent Measurement of Acetate Kinase and Pyruvate Phosphate Dikinase Activities using a Firefly Luciferase-Luciferin Reaction and Its Application to a Tandem Bioluminescent Enzyme Immunoassay"Anal. Sci.. 19. 105-109 (2003)
