新規血管侵入障壁遺伝子ChMrPノックアウトマウスの作製による機能解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13680803
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 宿南 知佐 京都大学, 再生医科学研究所, 助教授 (60303905)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山田 秀一 京都大学, ウィルス研究所, 助手 (20261133)
• Keywords: ChMrP / tenomodulin / chondromodulin-I / 強靭結合組織 / ノックアウトマウス / 腱 / 血管侵入障壁 / 血管新生

Research Abstract

chondromodulin-I related proein(ChMrP:最近tenomodul inと正式に命名)は、軟骨由来血管新生抑制因子chondromodulin-I(ChM-I)の関連遺伝子で、血管網に乏しい強靱結合組織に特異的に発現している。本年度は、ChMrP/tenomodulin遺伝子の制限酵素マップに基づいて、ジーンターゲティング用のターゲティングベクターを構築した。転写開始点を含む遺伝子の上流領域とexon1/intron1/exon2とintron2の一部をNeomycin phosphotransferase(Neo)で置換し、3'側にThymidine kinase(tk)を挿入してポジティブーネガティブ選択が行えるベクターを構築した。また、ターゲティングベクターの構築と平行して、相同組換え体の選別のために、5'相同遺伝子領域と3'相同遺伝子領域でDNAプローブ領域を決定した。同時に、迅速な解析の為に、ターゲティングベクターに含まれない遺伝子座領域、内在遺伝子座領域、外来遺伝子座領域の3つの領域にプライマーを設計し、PCR法によって相同組換え体の判定が行えるような条件を設定した。更に、ターゲティングベクターをエレクトロポレーション法によってES細胞に導入し、遺伝子導入したES細胞からDNAを抽出して、PCR法、サザンブロットによって相同組換え体の判定を行った。150クローンに関して判定を行ったが、現在のところ陽性クローンはまだ得られておらず、継続してスクリーニングを行っている。

Research Products

• [Publications] C.Shukunami: "Role of cartilage-derived anti-angiogenic factor, chondromodulin-I, during endochondral bone formation"Osteoarthritis Cartilage. 9. S91-S101 (2001)
• [Publications] S.W.Sachdev: "Sequence analysis of zebrafish chondromodulin-I and expression profile in the notochord and chondrogenic regions of developing cartilage"Mech.Dev.. 105. 1465-1472 (2001)
• [Publications] C.Shukunami: "Molecular cloning of tenomodulin, a novel chondromodulin-l related gene"Biochm.Biophys.Res.Commun.. 280. 1323-1327 (2001)
• [Publications] 宿南 知佐: "Chondromodulin-Iと関連遺伝子Tenomodulin"Clinical Calcium. 12. 44-50 (2002)