メラニン凝集ホルモン受容体SLC-1を介する情報伝達系の分子的解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13680859
• Research Institution: Saitama Medical University
• Principal Investigator: 斉藤 祐見子 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (00215568)
• Keywords: 摂食 / 神経ペプチド / Gタンパク質 / イーストツーハイブリッド

Research Abstract

2001年度、本研究により得られた新たな知見は2点ある。
1.CHO細胞やHEK293細胞へ外来性にMCH(メラニン凝集ホルモン)受容体SLC-1を強制発現させるとGi/o及びGqへのカップリングが認められる。しかしながら、SLC-1の機能的側面をさらに深く解析するためには本受容体を強制的ではなく、内在的に発現するモデル系を得ることが重要である。多数の細胞株をRT-PCR及びノザンブロットでスクリーニングしたところ、SLC-1内在性高発現株を3株見出した。そのうちのひとつ、ヒトメラノーマ細胞SK-MEL-37細胞においては、MCHはフォルスコリンで誘導させたcAMPを減少させ、さらにMAP kinaseを活性化することがわかった(EC50=28nM)。この活性は百日咳毒素感受性のため、本細胞に発現するSLC-1はGi/oにカップリングする。しかし、強制発現系における結果とは異なり、SK-MEL-37細胞においてはMCHによって細胞内カルシウム濃度の上昇はカルシウムイメージング法によってもリアルタイム測定法によっても認められなかった。これはSLC-1が細胞株において機能的に内在性高発現することを示した初めての結果である。この成果はBiochem. Biophys. Res. Commun.に発表した。
2.yest-two-hybrid法によりSLC-1 C末端部分と結合する因子を脳由来ライブラリーから探索した。その結果、既知分子2つ、新規の脳特異的発現分子1つの単離に成功した。現在引き続き解析中である。

Research Products

• [Publications] Saito, Y. et al.: "Endogenons melanin-concentrating hormone receptor SLC-1 in human melanoma SK-MEL-37 cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289. 44-50 (2001)
• [Publications] Saito, Y. et al.: "Expression of the melanin-concentrating hormone (MCH) recepter mRNA in the rat brain"J. Comp. Neurol.. 435. 26-40 (2001)
• [Publications] Clark, S. et al.: "The urotensinII receptor is expressed in the cholinergic mesopontine tegmentum of the rat"Brain Research. 923. 120-127 (2001)