2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13770104
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Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
田中 伸哉 北海道大学, 大学院・医学研究科, 講師 (70261287)
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| Keywords | アダプター分子 / Crk / シグナル伝達 / Rho |
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| Research Abstract |
本年度は研究計画に基づき以下の成果をあげた。
1.Crk発現誘導可能な細胞株の樹立と細胞運動能の解析:癌遺伝子であるv-Crkを発現誘導可能なラット線維芽細胞3Y1を樹立したところ、v-Crkを誘導後48時間以内に著明なアクチンストレスファイバー形成が観察された。このストレス倍バー形成はRho抑制因子であるボツリヌス菌体外毒素の成分であるC3で処理することによって抑制され、また、Rhoの下流因子であるROCK阻害薬であるY27632により同様の抑制が起こることから、CrkがRhoを活性化することを見出した。この成果は下記の学術雑誌に現在印刷中であり、また学会発表を行った。
2.Crkを介する細胞運動能を調節するシグナル伝達機構の解析:現在はさらにCrkが細胞骨格を制御するメカニズムを詳細に解析するためにヒトCrk-llをGFPと融合させた状態で発現誘導可能な細胞株を樹立を試みた。具体的なコンディショナル発現誘導系は、テトラサイクリンによる発現OffとIPTGによるONの両方のプロモーター領域を兼ね備えておりタイトな発現調節が期待されるpOPTETベクターを使用した。現在は一過性発現系では成功しており、安定株を樹立中である。また、dominant negative formのRho-N19(Silvio J Gutkind,NIHから入手済み)、あるいはROCK(京大成宮周教授から入手済み)を導入してCrk発現による運動能活性化を抑制することを確認している。
(1)Tsuda, M., Tanaka.S., Sawa, H., Hanafusa, H., and Nagashima, K.
Signalling adaptor protein v-Crk activates Rho and regulates cell motility in 3Y1 rat fibroblast cell line Cell growth ＆ Diff, 2002. in press
(2)津田真寿美、田中伸哉、澤洋文、長嶋和郎:アダプター分子Crkのアクチンストレスファイバー形成能の解析。 第90回日本病理学会総会 2001.4.5-7東京
(3)津田真寿美、田中伸哉、西原広史、澤洋文、長嶋和郎:アダプター分子v-Crkによるアクチン細胞骨格制御と細胞運動能の解析 第24回日本分子生物学会年会 2001.12.9-12横浜
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[Publications] Nagai, M., et al.: "Analysis of transforming activity of human synovial sarcoma-associated chimeric protein SYT-SSX1 bound to chromatin remodeling factor hBRM/hSNF2a"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98. 3843-3848 (2001)
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[Publications] Tanaka, S., et al.: "HHV8-negative primary effusion lymphoma of the peritoneal cavity presenting with a distinct immunohistochemical phenotype"Pathol.International. 51. 293-300 (2001)
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[Publications] Suzuki, S., et al.: "Broad distribution of the JC virus receptor contrasts with a marked cellular restriction of virus replication"Virology. 286. 100-112 (2001)
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[Publications] Ishimori, N., et al.: "Mixed allogeneic chimerism with wild-type strains ameliorates atherosclerosis in apoprotein E-deficeinet mice"J.Leukocyte Biolo.. 69. 732-740 (2001)
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[Publications] Kamimura, E., et al.: "New rat model for attention deficit hyperactive disorder(ADHD)"Comparative Medicine. 51. 245-251 (2001)
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[Publications] Fujioka, Y., et al.: "MM-1, a c-Myc-binding Protein, Is a Candidate for a Tumor Suppressor in Leukemia/Lymphoma and Tongue Cancer"J.Biol Chem.. 276. 45137-45144 (2001)
