2001 Fiscal Year Annual Research Report

C型肝炎ウイルス非構造蛋白領域における機能と発癌機序の解析

Research Project

Project/Area Number	13770286
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Research Institution	Tokyo Women's Medical University
Principal Investigator	田中純子 (加藤純子) 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (10266819)
Keywords	C型肝炎ウイルス / 肝細胞癌 / C型肝炎ウイルス非構造蛋白質領域 / トランスジェニックマウス
Research Abstract	C型肝炎ウイルス(HCV)がどのようなプロセスを経て、宿主を癌化へと導くのかは、全く解明されていない、肝細胞癌に特に関与しているといわれるNS3蛋白質の働きをみるために、DNA組み換え酵素であるCreにより、遺伝子の発現が開始されるCre/lox-Pスイッチング発現システムを用いて、HCV遺伝子の非構造蛋白質部分を組みこんだトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製し、解析を試みた。Creを発現する組み換えアデノウイルスを接種するか、または、Creを発現するマウスと交配させることによりHCV遺伝子を発現させた。慢性肝炎患者の血清から抽出したHCVを、NS2領域からNS5a領域までをクローニングし、Cre/lox-Pスイッチング発現ユニットに組みこみ、Tgマウスを作成した。トランスジーンの組み込みがあるものは、PCR法により11ライン確認された。サザンブロット解析の結果により正しい大きさと組換えのおこるトランスジーンを持つTgマウスは、9ラインであった。そのうち5ラインは、RT-PCR法によりmRNAが確認された。さらにノーザンプロツト法にて、正しい大きさをもつマウスは、2ライン認められた。mRNAのsequenccをおこない、2ラインとも正しいことが明らかになった。また、蛋白質の産生をみるため、AxCANCreを2回投与後、さらにブースターとしてC14抗原を投与し、経時的に血清中のC14抗体価を測定した。C14抗原投与2週間後にTgマウスは、C14抗体価は2.5以上と陽性を示した。以上よりこのTgマウスは、HCV蛋白質を発現させることと判断した。このTgマウスにCreを発現する組み換えアデノウイルスを接種を繰り返すこととで、HCV蛋白質の直接的細胞障害機序による肝細胞発癌のメカニズムと、CTLを介しておこる炎症と肝細胞の再生の繰り返しで、発癌が生じるか否かの検討をしている。まだ、HCV遺伝子非構造蛋白質だけでは、肝細胞発症は認められていないが、引き続き、発症に関係する他の因子とを複合して肝細胞発癌のメカニズムを検討中である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] T.Wakita: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J.Med.Virol.. 63(2). 308-317 (2000)
[Publications] T.Kato: "Regulated production of P21 core protein in hepatitis C virus cDNA by its C-terminal sequence"J.Biol.Chem.. (in press).
[Publications] 川上明美: "MC-FANの基準値の設定と種々の因子の影響についての検討"Hemororheology and relaterd research. 3. 9-14 (2000)
[Publications] 栗原毅: "BezafibrateのC型慢性肝炎に対する有効性の検討"臨床医薬. 16(9). 1405-1408 (2000)
[Publications] T.Kurihara: "Impaired blood rheology by remnant-like lipoprotein particles : Studies in patients with fatty liver disease"Clinical Hemorheology and Microcirculatlon. 24. 217-225 (2001)
[Publications] 加藤純子: "ウイルス性肝炎感染対策"Clinical Engineering. 12(5). 380-387 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

C型肝炎ウイルス非構造蛋白領域における機能と発癌機序の解析

Principal Investigator

田中 純子 (加藤 純子) 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (10266819)

Research Products

[Publications] T.Wakita: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J.Med.Virol.. 63(2). 308-317 (2000)

[Publications] T.Kato: "Regulated production of P21 core protein in hepatitis C virus cDNA by its C-terminal sequence"J.Biol.Chem.. (in press).

[Publications] 川上 明美: "MC-FANの基準値の設定と種々の因子の影響についての検討"Hemororheology and relaterd research. 3. 9-14 (2000)

[Publications] 栗原 毅: "BezafibrateのC型慢性肝炎に対する有効性の検討"臨床医薬. 16(9). 1405-1408 (2000)

[Publications] T.Kurihara: "Impaired blood rheology by remnant-like lipoprotein particles : Studies in patients with fatty liver disease"Clinical Hemorheology and Microcirculatlon. 24. 217-225 (2001)

[Publications] 加藤 純子: "ウイルス性肝炎感染対策"Clinical Engineering. 12(5). 380-387 (2001)

田中純子 (加藤純子) 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (10266819)

[Publications] 川上明美: "MC-FANの基準値の設定と種々の因子の影響についての検討"Hemororheology and relaterd research. 3. 9-14 (2000)

[Publications] 栗原毅: "BezafibrateのC型慢性肝炎に対する有効性の検討"臨床医薬. 16(9). 1405-1408 (2000)

[Publications] 加藤純子: "ウイルス性肝炎感染対策"Clinical Engineering. 12(5). 380-387 (2001)