一酸化窒素による成体運動ニューロン死:アデノウィルスベクターを用いた研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13770332
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 坂本 剛 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (50328324)
• Keywords: 成体運動ニューロン死 / neuronal NOS / アデノウイルス・ベクター

Research Abstract

筋萎縮性側索硬化症(ALS)や末梢神経損傷における運動ニューロン死の原因について,活性酸素・窒素種の深い関わりが指摘されている.一方,成体ラットでの末梢神経切断では運動ニューロン死は明瞭でないが,末梢神経引き抜き損傷では運動ニューロン死に先だって一酸化窒素合成酵素(NOS)の活性が上昇することが知られている.しかし,NOSの活性上昇が運動ニューロン死の直接の原因であるか否かはなお明確でない.本研究では,成体運動ニューロン死におけるNOSの役割について明らかにするために,neuronal NOS(nNOS)のsense,antisense cDNAを発現する組換えアデノウイルス・ベクターをそれぞれ作製した.ラットよりクローニングされたnNOSのcDNAを,アデノウイルス・ゲノムからE1A,E1B,E3遺伝子を欠損したウイルスDNAをもつ発現コスミドカセットpAxCAwtに組込んだ.このコスミドカセットDNAと親ウイルスDNAを293細胞にco-transfectし,得られたウイルス液を293細胞で継代し精製sense nNOS発現ウイルス(AxCArNNOS),antisense nNOSウイルス(AxCArSONN)を得た.これらウイルスの培養COS1細胞における感染発現をウエスタンブロットおよびRT-PCRにより確認した.今後これを用い,運動ニューロン死の明確でない末梢神経切断モデルにsense NOS遺伝子を導入することで運動ニューロン死を惹起できるか,逆に,運動ニューロン死とNOSの発現の明瞭な末梢神経引き抜きモデルにantisense NOS遺伝子を導入することで運動ニューロン死を防ぐことができるかを検討する予定である.

Research Products

• [Publications] Watabe K, et al.: "Adenoviral gene transfer of glial cell line-derived neurotrophic factor to injured adult motoneurons"Hum Cell. 14(1). 7-15 (2001)
• [Publications] Watabe K, et al.: "Establishment and characterization of immortalized Schwann cells from murine model of Niemann-Pick disease type C"J Peripher Nerv Syst. 6(2). 85-94 (2001)
• [Publications] Watabe K, et al.: "Elsevier Science B.V."Adenoviral GDNF gene therapy for injured adult motoneurons. Molecular Mechanism and Therapeutics of ALS. 10 (2001)