2001 Fiscal Year Annual Research Report
CRHのGnRHニューロンに対する直接作用について
| Project/Area Number |
13770928
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
|
| Research Institution | Yokohama City University |
|---|
Principal Investigator |
村瀬 真理子 横浜市立大学, 医学部・附属病院, 助手 (80315796)
|
|---|
| Keywords | CRH / GnRH / GT1-7細胞 |
|---|
| Research Abstract |
1.CRH receptor mRNAの測定
GT1-7細胞中のCRH受容体mRNAの遺伝子発現をRT-PCR(reverce transcription porimerase-chain reaction)を用いて調べた。CRH receptor 1に特異的なprimerを用いてRT-PCRを行い、予想された塩基数のPCR産物を得た。さらに、このPCR産物の塩基配列を確認した。
2.潅流実験
GT1-7細胞2×10^6個をcytodex beadsで2日間培養後、カラムに重層し、DMEMを潅流液とし、0.13ml/minの速度で潅流する。GnRH分泌が、定常状態になった後、潅流液にCRH(10^<-6>,10^<-8>,10^<-10>M)を添加し、カラム潅流液の6分毎の分画中のGnRH濃度をRIAで測定した。潅流液に、CRHを添加すると、潅流液中のGnRH濃度が上昇し、これは有意差をもってCRH濃度依存性に観察された。
3.培養実験
GT1-7細胞4×10^6個/dishをCRH(10^<-6>,10^<-8>,10^<-10>M)、CRH受容体拮抗薬α-helical CRH(10^<-6>M)を加えて30分間培養し、培養液中のGnRH濃度をRIAにて測定した。CRH添加培養によって培養液中のGnRH濃度は、CRH濃度依存性に増加した。また、このCRHによるGnRH増加は、CRH受容体拮抗薬α-helical CRHを同時に添加するとほぼ完全にブロックされた。このことより、CRHのGT1-7に対する作用はCRH受容体を介するものであることが推察された。
|
Research Products
(1 results)
