2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13771235
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
林 勝彦 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (90287277)
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| Keywords | μオピオイド受容体 / 顎関節 / 雌雄差 / In situ hybridization法 / ラット |
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| Research Abstract |
【目的】顎関節における末梢性鎮痛作用の雌雄差を解明することを目的として、雌性ラット顎関節滑膜におけるμオピオイド受容体mRNAおよびタンパク質の局在を雄性ラットと比較検討し、その局在分布様式および数的相違を明らかにする。
【方法】
1.ラット顎関節標本作成 同一条件下に飼育された6〜7週齢Wister系雌性および雄性ラット、各々10匹を4%パラホルムアルデヒド0.1M PBS溶液で灌流固定し、顎関節を摘出後さらに同固定液にて4℃、16時間浸漬固定を行った。摘出材料を10%EDTA溶液にて脱灰し、通法に従い脱水、パラフィン包埋、次いで矢状断にて厚さ4μmの連続切片を作製した。
2.In situ hybridization法 μオピオイド受容体に特異的と考えられた領域(45base)を選択し委託合成したジゴキシゲニン標識オリゴヌクレオチドプローブを用い、非放射線性ジゴキシゲニン法を応用した。さらにアルカリフォスファターゼ発色により核酸を検出した。
3.免疫組織化学的染色 抗μオピオイド受容体(ケミコン・AB1562)ポリクローナル抗体を用いて間接法(PAP法)にて施行した。
4.データ解析 上記実験により得られた標本の組織像をコンピューターへ画像入力し、画像解析システムにて陽性スポット数を定量的に分析した。
【結果】今期においては、雄性ラットの顎関節滑膜におけるμオピオイド受容体mRNAの発現およびタンパク質の局在について解析した。その結果、μオピオイド受容体は滑膜の神経組織やマクロファージ、肥満細胞に局在し、その陽性スポット数は後方部滑膜と比較し前方部滑膜において有為に多かった(Mann-Whitney test, P<0.001)。以降、標本作成済みの雌性ラット顎関節滑膜に関して解析を進め、雄性ラット顎関節で得られた結果と比較検討する予定である。
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Research Products
(1 results)
