OK-432由来リポタイコ酸関連分子の細胞受容体の探索

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13877343
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 佐藤 光信 徳島大学, 歯学部, 教授 (00028763)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡本 正人 徳島大学, 歯学部, 助手 (10243718)
• Keywords: OK-432 / リポタイコ酸関連分子 / 細胞受容体 / Toll-like receptor 4 / IFN-γ / INF-α / 抗腫瘍効果 / ノックアウトマウス

Research Abstract

1.A群溶血性レンサ球菌製剤OK-432より、OK-432のIFN-γ誘導部位を認識する単クローン抗体TS-2をリガンドとしたアフィニティ・カラムを用いてリポタイコ酸関連分子OK-PSAを調製した。
2.C3H/HeNマウス[Toll-like receptor(TLR)4:野生型]及びC3H/HeJマウス(TLR4:aa712^<pro→his>)から脾細胞を調製し、更に、抗アシアロGM1抗体及び抗マウスCD3抗体と反応させた後、家兎血清補体で処理して、NK及びT細胞を除去した脾細胞標品を調製した。この処理マウス脾細胞をOK-PSA(10^<-1>μg/ml)存在下で培養し、IFN-γ及びTNF-αのmRNAとタンパクの発現を、RT-PCR或いはELISAにて検索した。その結果、C3H/HeNマウスにのみIFN-γ及びTNF-αの発現を認めた。
3.C3H/HeN及びC3H/HeJマウスに同系腫瘍細胞SCCVIIを移植し担癌マウスを調製し、OK-PSAを投与して治療を行った。その結果、C3H/HeNマウスにおいて、C3H/HeJマウスと比較して有意に高い抗腫瘍効果が認められた。
4.C57BL/6マウスにおいて調製したTLR1-/-,TLR2-/-,TLR4-/-のノックアウトマウス及び野生型C57BL/マウスの脾細胞を上記(2)で述べたように調製し、OK-PSA存在下で培養し、IFN-γ及びTNF-αの発現誘導をRT-PCR及びELISAを用いて遺伝子・タンパクレベルで検索した。その結果、TLR-4-/-マウス脾細胞においてのみ、IFN-γ及びTNF-αの発現誘導が検出されなかった。以上の結果より、OK-PSAの細胞受容体はTLR4であることが強く示唆された。

Research Products

• [Publications] Masato Okamoto: "Enhancement of anti-cancer immunity by lipoteichoic acid-related molecule isolated from a penicillin-killed group A Streptococcus"Cancer Immunol Immunother. 50(8). 408-418 (2001)
• [Publications] Go Ohe: "Th1-cytokine induction and anti-tumor effect of 55kd protein isolated from Aeginetia indica L, a parasitic plant"Cancer Immunol Immunother. 50(5). 251-259 (2001)
• [Publications] Masato Okamoto: "Comparison of cytokine-inducing activity in lipoteichoic acid-related molecule isolated from a penicillin-killed group A"Int immunopharmacol. 1(11). 1957-1968 (2001)
• [Publications] Masato Okamoto: "Severe impairment of anti-cancer effect of lioteichoic acid-related molecule isolated from a penicillin-killed Streptocuccus pygenes"Int immunopharmacol. 1(9-10). 1789-1795 (2001)