生体内での測定を目指した簡便な一酸化窒素(NO)測定技術の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13877401
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 松島 明美 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教務員 (70116862)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松本 満 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (60221595)
• Keywords: 一酸化窒素(NO) / 吸収スペクトル / 電子スピン共鳴(ESR)

Research Abstract

一酸化窒素(NO)は不安定なフリーラジカルであり、生体内での挙動を正確に捕らえることが困難であったことが、NOの生理学的、あるいは病理学的役割を長いあいだ解明できなかった一因である。このようなNOの特性をふまえて、生体維持機構におけるNOの位置付けを明確にするためには、NOを正確に、しかも簡便に測定する技術の開発が必要不可欠である。私達は、吸収スペクトルの測定というきわめて簡便な方法(吸収法)によってNOの測定が可能であることを発見し、この測定技術の確立と臨床応用を目指して研究を進めている。
現在、NOの産生を直接測定するためには、PTIOを代表とするNOの選択的消去剤が利用されている。すなわち、PTIOはNOとの反応によりPTIを生成するが、産生されたPTIの量を指標としてNOの定量が行われる。しかしながら、これまでPTIの検出には電子スピン共鳴(ESR)スペクトルの測定が用いられてきたため、広く一般に実施可能な測定法であるとは言い難い。私達は、PTIOからPTIへの生成に伴い、560nmにおける吸光度の減少と、420nmにおける吸光度の上昇が起こることを発見し、この現象を利用して簡便なNO測定法の開発に取り組んでいる。
本年度は、このような420nmにおける吸光度の上昇が、実際にPTIOからPTIへの変換に基づくことを従来から用いられてきたESRスペクトルの測定との比較によって確認した。すなわち、PTIOとして測定した分画(560nmの吸収分画)とPTIとして測定した分画(420nmの吸収分画)のそれぞれについて、ESRによる解析を行ったところ、これらの分画は、それぞれPTIOおよびPTIに該当するESRパターンを示した。すなわち、420nmにおける吸光度の上昇はNOによるPTIOからPTIへの変換によることが確認できた。

Research Products

• [Publications] Matsushima, A., et al.: "Essential role of NF-кB-inducing kinase and IкB-kinase α in NF-кB activation through lymphotoxin-β receptor but not through TNF receptor-I"Journal of Experimental Medicine. 193(5). 631-636 (2001)