2013 Fiscal Year Annual Research Report
シロイヌナズナにおけるVIP1介在性浸透圧応答経路の全容解明
| Project/Area Number |
13J07247
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
津釜 大侑 東京大学, 大学院農学生命科学研究科, 特別研究員(PD)
|
|---|
| Keywords | 浸透圧応答 / タンパク質相互作用 / 転写制御 / 信号伝達 |
|---|
| Research Abstract |
本年度は以下の四項目の解析を行った。
(1) VIP1とAGB1との相互作用に関する解析
AGB1はシロイヌナズナのヘテロ三量体Gタンパク質βサブユニットであり、形態や種々の刺激応答性を制御するタンパク質である。酵母ツーハイブリッド法によるスクリーニングによりVIP1とAGB1が酵母細胞内で相互作用することが示唆されたため、これらの因子間の相互作用について追究した。その結果、VIP1とAGB1がin vitro及び植物細胞内においても物理的に相互作用し、植物細胞においては、浸透圧の変化に応じてVIP1-AGB1複合体の細胞内局在が変化することが明らかになった。一方、AGB1を欠損した変異体においてもVIP1の細胞内局在の変化のパターンや生理的機能は維持されており、VIP1-AGB1相互作用の持つ意義(互いの機能に与える影響)は不明であった。
(2) VIP1と遷移金属との相互作用に関する解析
(1)において、精製したVIP1を用いて解析を行っていたところ、VIP1がニッケルに対する結合能を持っことを見出した。金属は一般にタンパク質の補因子として機能しうることから、VIP1の金属結合性について更に評価した。その結果、VIP1はニッケルに加えて亜鉛とコバルトにも結合し、コバルトはVIP1のDNA結合能に影響しうることが示唆された。
(3) VIP1相同因子の機能解析
シロイヌナズナにはVIP1に似たアミノ酸配列を持つ因子が十以上存在する。これら(をコードする遺伝子)の機能について解析を行った結果、これらがVIP1と同程度に発現しており、VIP1と同様の細胞内局在の変化のパターンを示し、VIP1と同様に転写活性化能を持つことが示唆された。
(4) VIP1結合配列の同定
CYP707A1、CYP707A3なる低浸透圧応答性遺伝子のプロモーターにVIP1は結合するが、それがAGCTGT又はAGCTGG (AGCTGT/G)を介したものであることを明らかにした。先行研究においてマイクロアレイ解析により低張液処理で発現が上昇する遺伝子が調べられていたが、それら遺伝子のプロモーターにおけるAGCTGT/Gの出現頻度はゲノム上の全遺伝子のプロモ一ターにおけるAGCTGT/Gの出現頻度より高く、AGCTGT/Gが低張液応答性遺伝子の発現に関与することが示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ほぼ当初の計画通りに解析を進めることができたため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
現在まで本研究は順調に進んでおり、特記すべき推進方策はない。今後も予定通り研究が進むよう努めたい。
|
Research Products
(2 results)
