2003 Fiscal Year Annual Research Report

Toll-like Receptorに会合するMDタンパクの遺伝学的解析

Research Project

Project/Area Number	14021012
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	三宅健介東京大学, 医科学研究所, 教授 (60229812)
Keywords	自然免疫 / Toll-like receptor / Lipopolysaccharide / MD-2
Research Abstract	自然免疫機構において、病原体認識のメカニズムは明らかではない。Toll-like receptors(TLRs)が病原体を認識してシグナルを伝達するが、その認識機構は分子レベルでの理解には至っていない。本研究ではグラム陰性菌の膜糖脂質であるエンドトキシン(LPS, Lipopolysaccharide)の認識に焦点を絞り、その認識機構の分子レベルでの解明を目的とする。LPSの認識にTLR4が必須である。我々はTLR4の細胞外ドメインに会合する分子MD-2を発見し、この分子がLPS認識に重要な役割を果たしていることを、MD-2ノックアウトマウスがLPSに応答しないことを示すことで証明した。したがって、LPSはTLR4-MD-2という複合体によって認識されることが明らかになった。本年度はTLR4-MD-2によるLPS応答性を明らかにするために、TLR4-MD-2とLPSとの結合を調べた。細胞をLPS刺激した後に、TLR4-MD-2を免疫沈降し、その沈降物におけるLPSを検出すると、LPSが共沈することが明らかになった。LPSに結合するCD14の共沈は認められなかった。この結果は、少なくともCD14が関与しないTLR4-MD-2とLPSとの結合を示している。そこで、放射性同位元素で標識したLPSの活性部位であるLipid Aを用いて、結合を定量的に調べたところ、Lipid Aの量依存性にしかも飽和状態に達しうるような特異的な結合を示した。その解離定数は約3x10^<-8>Mであった。これらの結果はLPSあるいはLipid AがTLR4-MD-2に特異的に結合していることを細胞を用いて、定量的に解析した初めての報告である。今後は結合後のTLR4-MD-2の変化を調べてゆく計画である。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Miyake, K.: "Innate recognition of lipopolysaccharide by CD14 and toll-like receptor 4-MD-2:unique roles for MD-2."Int Immunopharmacol.. 1. 119-128 (2003)
[Publications] Okamoto M.: "Involvement of Toll-Like Receptor 4 Signaling in Interferon-gamma Production and Antitumor Effect by Streptococcal Agent OK-432."J.Natl.Cancer Inst.. 95. 316-326 (2003)
[Publications] T Matsunaga: "Interaction between leukemic-cell VLA-4 and stromal fibronectin is a decisive factor for minimal residual disease of acute myelogenous leukemia."Nat.Med.. 9. 1158-1165 (2003)
[Publications] Adib-Conquy M: "Toll-like receptor-mediated tumor necrosis factor and interleukin-10 production differ during systemic inflammation."Am J Respir Crit Care Med.. 168. 158-164 (2003)
[Publications] S Akashi: "Lipopolysaccharide Interaction with Cell Surface Toll-like Receptor 4-MD-2:Higher Affinity than that with MD-2 or CD14."J.Exp.Med.. 198. 1035-1042 (2003)
[Publications] Kimoto M: "Role of TLR4/MD-2 and RP105/MD-1 in innate recognition of lipopolysaccharide."Scand J Infect Dis.. 35. 568-572 (2003)
[Publications] Miyake K.: "Endotoxin recognition molecules, Toll-like receptor 4-MD-2."Semin Immunol.. 16. 11-16 (2004)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

Toll-like Receptorに会合するMDタンパクの遺伝学的解析

Principal Investigator

三宅 健介 東京大学, 医科学研究所, 教授 (60229812)

Research Products

[Publications] Miyake, K.: "Innate recognition of lipopolysaccharide by CD14 and toll-like receptor 4-MD-2:unique roles for MD-2."Int Immunopharmacol.. 1. 119-128 (2003)

[Publications] Okamoto M.: "Involvement of Toll-Like Receptor 4 Signaling in Interferon-gamma Production and Antitumor Effect by Streptococcal Agent OK-432."J.Natl.Cancer Inst.. 95. 316-326 (2003)

[Publications] T Matsunaga: "Interaction between leukemic-cell VLA-4 and stromal fibronectin is a decisive factor for minimal residual disease of acute myelogenous leukemia."Nat.Med.. 9. 1158-1165 (2003)

[Publications] Adib-Conquy M: "Toll-like receptor-mediated tumor necrosis factor and interleukin-10 production differ during systemic inflammation."Am J Respir Crit Care Med.. 168. 158-164 (2003)

[Publications] S Akashi: "Lipopolysaccharide Interaction with Cell Surface Toll-like Receptor 4-MD-2:Higher Affinity than that with MD-2 or CD14."J.Exp.Med.. 198. 1035-1042 (2003)

[Publications] Kimoto M: "Role of TLR4/MD-2 and RP105/MD-1 in innate recognition of lipopolysaccharide."Scand J Infect Dis.. 35. 568-572 (2003)

[Publications] Miyake K.: "Endotoxin recognition molecules, Toll-like receptor 4-MD-2."Semin Immunol.. 16. 11-16 (2004)

三宅健介東京大学, 医科学研究所, 教授 (60229812)