2002 Fiscal Year Annual Research Report

発生初期の細胞分化過程におけるプレ死細胞の可視化システムの開発

Research Project

Project/Area Number	14034270
Research Institution	The Institute of Physical and Chemical Research
Principal Investigator	三浦正幸理化学研究所, 細胞修復機構研究チーム, チームリーダー (50202338)
Keywords	細胞死 / 神経発生 / FRET / カスパーゼ / イメージング
Research Abstract	本研究はin vivoにおける細胞死を起こす直前の細胞(プレ死細胞)の検出系確立を目指し、モデル生物としてマウス及びショウジョウバエを用いて、FRETシステムによりプレ死細胞の同定を効率的に行おうとするものである。具体的には細胞死の実行が完了する前に細胞死実行プロテアーゼであるCaspaseの活性化が起こることを利用し、FRET(Fluorescence Resonance Energy Transfer)法によりこれらの現象が起きている細胞のみを個体内で検出する。蛍光物質ECFPとEYFPの間にCaspaseの認識配列を挿入した人口融合タンパク質を細胞内に発現させることにより、Caspaseが活性化した場合、EYFP/ECFPの発光比率の変化でCaspase活性化途中の細胞が検出可能となる。生体での観察を目標としているため、細胞内のpHやCl^-の変化に影響されにくいGFP variantを使う必要があるが、一般に使用されているEYFPはpHやCl^-の変化に感受性が高く適さない。そこでFRET acceptorとして細胞内環境の変化に安定性の高いVenusを用いることにした。ECFPとVenusの連結部にはグリシンで挟まれたフレキシブルなリンカーを配し、リンカー内にDEVDというCaspase3によって特異的に切断される配列を挿入した。このCaspase基質分子をSCAT(Sensor for activated caspases base on FRET)と命名した。SCATを用いることによって細胞でのカスパーゼの活性化がリアルタイムに検出できた。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Takemoto, K., Nagai, T., Miyawaki, A., Miura, M.: "Spatio-temporal activation of caspase revealed by indicator that is insensitive to environmental effects"J. Cell. Biol.追記. 160(in press). (2003)
[Publications] Kuranaga, E., Kanuka, H., Igaki, T., Sawamoto, K., Ichijo, H., Okano, H., Miura, M.: "Reaper-mediated inhibition of DIAP1-induced Drosophila TRAF1 degradation leads to JNK activation"Nature Cell Biol.. 4. 705-710 (2002)
[Publications] Takeyama, K., Ito, S., Yamamoto, A., Tanimoto, H., Hurutani, T., Kanuka, H., Miura, M., Tabata, T., Kato, S.: "Androgen-dependent neurodegeneration by polyglutamine-expanded human androgen receptor in Drosophila"Neuron. 35. 855-864 (2002)
[Publications] Kanda, H., Igaki, T., Kanuka, H., Yagi, T., Miura, M.: "Wengen, a member of the Drosophila TNF receptor superfamily, is required for Eiger signaling"J. Biol. Chem.. 277. 28372-28375 (2002)
[Publications] Igaki, T., Kanda, H., Yamamoto-Goto, Y., Kanuka, H., Kuranaga, E., Aigaki, T., Miura, M.: "Eiger ; a TNF superfamily ligand that triggers the Drosophila JNK pathway"EMBO J.. 21. 3009-3018 (2002)
[Publications] Igaki, T., Yamamoto-Goto, Y., Tokushige, N., Kannda, H., Miura, M.: "Downregulation of DIAP1 triggers a novel Drosophila cell death pathway mediated by DARK and DRONC"J. Biol. Chem.. 277. 23103-23106 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

発生初期の細胞分化過程におけるプレ死細胞の可視化システムの開発

Principal Investigator

三浦 正幸 理化学研究所, 細胞修復機構研究チーム, チームリーダー (50202338)

Research Products

[Publications] Takemoto, K., Nagai, T., Miyawaki, A., Miura, M.: "Spatio-temporal activation of caspase revealed by indicator that is insensitive to environmental effects"J. Cell. Biol.追記. 160(in press). (2003)

[Publications] Kuranaga, E., Kanuka, H., Igaki, T., Sawamoto, K., Ichijo, H., Okano, H., Miura, M.: "Reaper-mediated inhibition of DIAP1-induced Drosophila TRAF1 degradation leads to JNK activation"Nature Cell Biol.. 4. 705-710 (2002)

[Publications] Takeyama, K., Ito, S., Yamamoto, A., Tanimoto, H., Hurutani, T., Kanuka, H., Miura, M., Tabata, T., Kato, S.: "Androgen-dependent neurodegeneration by polyglutamine-expanded human androgen receptor in Drosophila"Neuron. 35. 855-864 (2002)

[Publications] Kanda, H., Igaki, T., Kanuka, H., Yagi, T., Miura, M.: "Wengen, a member of the Drosophila TNF receptor superfamily, is required for Eiger signaling"J. Biol. Chem.. 277. 28372-28375 (2002)

[Publications] Igaki, T., Kanda, H., Yamamoto-Goto, Y., Kanuka, H., Kuranaga, E., Aigaki, T., Miura, M.: "Eiger ; a TNF superfamily ligand that triggers the Drosophila JNK pathway"EMBO J.. 21. 3009-3018 (2002)

[Publications] Igaki, T., Yamamoto-Goto, Y., Tokushige, N., Kannda, H., Miura, M.: "Downregulation of DIAP1 triggers a novel Drosophila cell death pathway mediated by DARK and DRONC"J. Biol. Chem.. 277. 23103-23106 (2002)

三浦正幸理化学研究所, 細胞修復機構研究チーム, チームリーダー (50202338)