2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14081209
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
丹羽 仁史 理化学研究所, 多能性幹細胞研究チーム, チームリーダー (80253730)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
升井 伸治 理化学研究所, 多能性幹細胞研究チーム, 研究員 (20342850)
中尾 和貴 理化学研究所, 変異マウス開発チーム, 研究員 (20217657)
山中 伸弥 奈良先端科学技術大学院大学, 遺伝子教育研究センター, 助教授 (10295694)
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| Keywords | ES細胞 / 初期化 / Oct-3 / 4 |
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| Research Abstract |
初期胚において未分化状態特異的に発現する転写因子Oct-3/4遺伝子産物の分布を正確に追跡するために、ES細胞において内在性Oct-3/4遺伝子を機能的Oct-3/4-GFP融合蛋白を発現するように相同遺伝子組み換え法を用いて改変した。得られた細胞において、未分化状態特異的に融合蛍光蛋白が核に局在することを確認し、これを胚盤胞に注入してキメラマウスを作成した。現在germline transmissionを経て、ホモ化を試みている。
一方、未分化状態を維持するのに必要な外界からのシグナルを網羅すべく、マウスES細胞の無フィーダー無血清培養条件の確立を試みてきたが、本年度ペプチドホルモンを用いてその実現に成功した(国内特許出願済み、海外特許出願準備中)。この培養システムを用いてES細胞の樹立も可能であり、この条件で維持されたES細胞のgermline transmissionも確認した。現在、このホルモンが作動させる細胞内シグナルの分子機構の解析を進めている。
マイクロアレイ法による遺伝子発現解析の有効性は、洪博士との共同研究によるES細胞とTS(trophoblast stem)細胞の遺伝子発現比較検討により確認することが出来た(Tanaka, TT et al., Genome Res.,2002)、今後同様の手法を用いて種々のサンプルを解析することにより、細胞初期化のメカニズムの一端が明らかにされるであろう。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Tateishi, S., et al.: "Enhanced genomic instability and defective postreplication repair in RAD18 knockout mouse embryonic stem cells"Mol Cell Biol. 23・2. 474-481 (2003)
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[Publications] Niwa, H., et al.: "Phenotypic complementation establishes requirements for specific POU domain and generic transactivation function of Oct-3/4 in embryonic stem cells"Mol Cell Biol. 22・5. 1526-1536 (2002)
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[Publications] Takashima, S., et al.: "Targeting of both mouse neuropilin-1 and neuropilin-2 genes severely impairs developmental yolk sac and embryonic angiogenesis"Proc Natl Acad Sci USA. 99・6. 3657-3662 (2002)
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[Publications] Fujikura, F., et al.: "Differentiation of embryonic stem cells is induced by GATA factors"Genes & Dev. 16・7. 784-789 (2002)
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[Publications] Tomioka, M., et al.: "Identification of Sox-2 reguratory region which is under the control of Oct3/4-Sox-2 complex"Nucleic Acids Res. 30・14. 3202-3013 (2002)
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[Publications] Tanaka, T.T., et al.: "Gene expression profiling of embryo-derived stem cells reveals candidate genes associated with pluripotency and lineage Specificity"Genome Res. 12・12. 1921-1928 (2002)
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[Publications] 丹羽仁史: "医学のあゆみ"誘導的発現システム開発の現状. 5 (2002)
