2002 Fiscal Year Annual Research Report

コレステロール体内恒常性に関与するATP依存トランスポーターの分子基盤

Research Project

Project/Area Number	14360053
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	植田和光京都大学, 農学研究科, 助教授 (10151789)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	天知輝夫京都大学, 農学研究科, 教授 (30301245) 木岡紀幸京都大学, 農学研究科, 助手 (90234179) 松尾道憲京都大学, 農学研究科, 助手 (00335308)
Keywords	生活習慣病 / コレステロール / リン脂質 / ABCタンパク質 / トランスポーター / 構造解析 / ABCA1 / 動脈硬化
Research Abstract	本研究は、ABCA1の機能および分子メカニズムを(1)ABCA1がATP依存トランスポーターとして機能しているのか?(2)輸送する基質は何か?(3)高密度リポタンパク質(HDL)産生時にapoAIと直接相互作用するのか?など分子メカニズムを明らかにするとともに、細胞内局在、動態を細胞生物学に明らかにし、最終的には3次元構造を明らかにするために全長ABCA1を結晶化することを目的としていた。血中の高密度リポタンパク質が消失する遺伝病であるタンジール病で見出された変異を導入したABCA1および野生型のGFP融合タンパク質(ABCA1-GFP)を安定的に発現するHEK293細胞株を作製した。蛍光顕微鏡による融合タンパクの蛍光解析とグリコシダーゼによる糖鎖型の解析から、野生型ABCA1とABCA1-W590S変異体は細胞膜に局在し、ABCA1-R587WとABCA1-Q597R変異体は小胞体に残留することが明らかになった。R587WとQ597R2つの変異体は細胞膜に局在できないためタンジール病を引き起こすと考えられる。ATPとの相互作用を検討するため、安定発現株から膜画分を調製し、ATP類似体8-azido-[α-32P]ATPで光親和性標識した。野生型ABCA1とABCA1-W590S変異体はMn存在下8-azido-[α-32P]ATPで標識され、バナジン酸によって標識量が増加した。W590S変異体は野生型と同様にATP結合、加水分解は起こることが明らかになった。さらに、ヒトABCA1をバキュロウイルス-昆虫細胞系を用いて大量発現することに成功した。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Tanaka, A.R.: "Effects of mutations of ABCA1 in the first extracellular domain on subcellular trafficking and ATP binding/hydrolysis"J Biol Chem.. 278. 8815-8819 (2003)
[Publications] Shitan, N.: "Involvement of CjMDR1, a plant MDR-type ABC protein, in alkaloid transport in Coptis japonica"Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 100. 751-756 (2003)
[Publications] Sugimoto, Y.: "Reversal of breast cancer resistance protein-mediated drug resistance by estrogen antagonists and agonists"Mol. Cancer Ther.. 2. 105-112 (2003)
[Publications] Tanaka, A.R.: "ATP binding/hydrolysis by and phosphorylation of peroxisomal ABC proteins PMP70 (ABCD3) and ALDP (ABCD1)"J Biol Chem.. 277. 40142-40147 (2002)
[Publications] Matsuo, M.: "Mutations in the linker domain of NBD2 of SUR inhibit transduction but not nucleotide binding"EMBO J. 21. 4250-4258 (2002)
[Publications] Hahimoto, K.: "Trafficking-defect and functional-defect by mutations of the ATP-binding domains in multidrug resistance protein 2 (MRP2, ABCC2) in patients with Dubin-Johnson syndrome"Hepatology. 36. 1246-1252 (2002)
[Publications] 稲垣暢也: "ABCトランスポーター-生体防御のABC-遺伝子から疾患まで"診断と治療社. 82 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

コレステロール体内恒常性に関与するATP依存トランスポーターの分子基盤

Principal Investigator

植田 和光 京都大学, 農学研究科, 助教授 (10151789)

Research Products

[Publications] Tanaka, A.R.: "Effects of mutations of ABCA1 in the first extracellular domain on subcellular trafficking and ATP binding/hydrolysis"J Biol Chem.. 278. 8815-8819 (2003)

[Publications] Shitan, N.: "Involvement of CjMDR1, a plant MDR-type ABC protein, in alkaloid transport in Coptis japonica"Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 100. 751-756 (2003)

[Publications] Sugimoto, Y.: "Reversal of breast cancer resistance protein-mediated drug resistance by estrogen antagonists and agonists"Mol. Cancer Ther.. 2. 105-112 (2003)

[Publications] Tanaka, A.R.: "ATP binding/hydrolysis by and phosphorylation of peroxisomal ABC proteins PMP70 (ABCD3) and ALDP (ABCD1)"J Biol Chem.. 277. 40142-40147 (2002)

[Publications] Matsuo, M.: "Mutations in the linker domain of NBD2 of SUR inhibit transduction but not nucleotide binding"EMBO J. 21. 4250-4258 (2002)

[Publications] Hahimoto, K.: "Trafficking-defect and functional-defect by mutations of the ATP-binding domains in multidrug resistance protein 2 (MRP2, ABCC2) in patients with Dubin-Johnson syndrome"Hepatology. 36. 1246-1252 (2002)

[Publications] 稲垣暢也: "ABCトランスポーター-生体防御のABC-遺伝子から疾患まで"診断と治療社. 82 (2002)

植田和光京都大学, 農学研究科, 助教授 (10151789)