2002 Fiscal Year Annual Research Report
痛覚シナプスにおける情報伝達の分子機構の解明とin vitro鎮痛評価系の開発
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14360171
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
伊藤 茂男 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (40109509)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
太田 利男 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (20176895)
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| Keywords | 背根神経節細胞 / 新生ラット摘出脊髄標本 / 副脊髄質細胞 / オピオイド受容体 / アドレナリンα2受容体 / バニロイド受容体 / 5-HT受容体 / 鎮痛・鎮静薬 |
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| Research Abstract |
1)背根神経節一次知覚ニューロンのバニロイド受容体とcapsaicin反応
新生ラットの摘出背根神経節から一次知覚ニューロン(DRG細胞)を分離し、カバーグラス上に培養した。培養DRG細胞にバニロイド受容体(capsaicin受容体)が発現しているか否かを調べる目的で、capsaicinを投与すると、濃度依存性に細胞内Caが増加した。低濃度capsaicin(10nM)で反応する細胞と高濃度(100nM)でしか反応しない細胞に大別された。
2)ブタオピオイド受容体の機能解析
培養ブタ副腎髄質細胞にはμ-、δ-及びκ-オピオイド受容体のmRNAが検出できること、さらに、μ-、δ-及びκ-オピオイド受容体に特異体的な刺激薬を用いて電位依存性Caチャネル電流に対する作用を調べた結果、ブタ髄質細胞にはこれらのオピオイド受容体は主に電位依存性N型Caチャネル電流を抑制し、カテコールアミン分泌を抑制すること、このCa電流の抑制には百日咳毒素感受性G蛋白質が関与していることが明にとなった。
3)ブタのバニロイド受容体遺伝子のクローニングと培養細胞への発現
これまで報告されているラット及びヒトのバニロイド受容体の塩基配列に基づきブタ脊髄神経節からPCRクローニングを行った結果、2484塩基対で、ラットとヒトに対するアミノ酸相同性はそれぞれ75と77%のブタバニロイド受容体遺伝子を分離した。現在、本受容体遺伝子を機能解析するため、GFP融合発現ベクターに組み込み、発現の有無を調べている。
4)ラット摘出脊髄標本における発痛物質と鎮痛薬の作用
新生ラット摘出脊髄の腹根に記録電極を装着し、対応する背根を電気的に刺激し、反射電位を記録した。強い刺激を背根に与えると腹根から、約20秒続く、ゆっくりとした反射電位(sVRP)が記録された。この電位はオピオイド、アドレナリンα2及び5-HT受容体の刺激薬で濃度依存性に抑制された。これら薬物の併用すると抑制作用は相加的であり、各々の抑制神経系は独立していることが示唆された。
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[Publications] Go Kitamura: "Inhibitory effects of opioids on voltage-dependent Ca2+ channels and catecholamine secretion in cultured porcine adrenal chromaffin cells"Brain Research. 942. 11-22 (2002)
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[Publications] Toshio Ohta: "Functional relation between caffein-and muscarine-sensitive Ca2+ stores and no Ca2+ releasing action of cyclic adenosine diphosphate-ribose in guinea-pig adrenal chromaffin cells"Neuroscience Letters. 326. 167-170 (2002)
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[Publications] Toshio Ohta: "Relaxant mechanisms of parathyroid hormone in rat mesenteric artery"Journal of Cardiovascular Pharmacology. 40. 554-563 (2002)
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[Publications] Kazuki Yonekubo: "Inhibitory effects of cortical steroids and adrenocorticotropic hormone on catecholamine secretion in guinea-pig perfused adrenal glands"Autonomic & Autocoid Pharmacology. 22. 93-101 (2002)
