2002 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
14370103
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokushima |
|---|
Principal Investigator |
足立 昭夫 徳島大学, 医学研究科, 教授 (90127043)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小山 一 徳島大学, 医学研究科, 助教授 (80109074)
藤田 美歌子 徳島大学, 医学研究科, 助手 (00322256)
|
|---|
| Keywords | HIV-1 / HIV-2 / Vif / Vpx / Vpr / Vpu / Nef |
|---|
| Research Abstract |
本研究では、HIVアクセサリー蛋白質の機能領域やこれに関与する細胞因子を系統的・網羅的な点変異体解析で確定し、アクセサリー蛋白質の機能の本態解明を目指す。本年度は主として、(1)HIV-1 Vifの機能解析、(2)HIV-2 Vpx/Vprの機能解析、(3)HIV-1 Nef及びVpuの変異体作製、について研究を行い、以下の成果を得た。
(1)192アミノ酸からなるHIV-1 Vif (NL432株)の88番目から93番目のアミノ酸配列(EWRKKR)には荷電残基が集中的に含まれている。この領域の機能を知るため、様々な変異体を構築し、非許容細胞H9でのウイルス増殖とVifの発現を検討した。その結果、この領域の親水性や電荷の程度はウイルス増殖に関係しないことが明らかになった。一方、アミノ酸欠失体の実験結果から、E88およびW89はVifの安定的発現とウイルス増殖に必須であった。E88欠失体のVif発現量の低下はプロテアソーム阻害剤の添加で回復した。また、プロテアソーム阻害剤添加後のVif発現量の増加はNef、Vpu、Gagのそれよりはるかに多いことがわかった。(2)HHV-2 Vpx/Vpr (GL-AN株)発現欠損体の解析から、T細胞中でもVpxがHIV-2ゲノムの核移行を促進すること、また、Vpxが存在しない場合にVprはウイルス複製に影響を与え、その効果は後期過程にあることを示した。さらに、Vpxの点変異体の増殖能をT細胞とマクロファージとで検討した。その結果、どちらか一方の細胞あるいは両方の細胞でのウイルス複製に重要であるアミノ酸の存在が明らかになった。(3)HIV-1 Nef (NL432株)の全領域にわたる点変異体30種を作製した。これらからVpuとの2重変異体も作製中である。
|
-
[Publications] Fujita, M.: "Subtle mutations in the cysteine region of HIV-1 Vif drastically alter the viral replication phenotype"Microbes and Infection. 4. 621-624 (2002)
-
[Publications] Tomiyama, H.: "Different effects of Nef-mediated HLA class I down-regulation on human immunodeficiency virus type 1-specific CD8^+-T cell cytolytic activity....."Journal of Virology. 76. 7535-7543 (2002)
-
[Publications] Fujita, M.: "Apparent lack of trans-dominant negative effects of various vif mutants on the replication of HIV-1"Microbes and Infection. 4. 1203-1207 (2002)
-
[Publications] Fujita, M.: "Amino acid residues 88 and 89 in the central hydrophilic region of human immunodeficiency virus type 1 Vif are critical for viral....."Journal of Virology. 77. 1626-1632 (2003)
-
[Publications] Ueno, F.: "Vpx nd Vpr proteins of HIV-2 up-regulate the viral infectivity by a distinct mechanism in lymphocytic cells"Microbes and Infection. (in press).
-
[Publications] Fujita, M.: "Susceptibility of HVS-immortalized lymphocytic HSC-F cells to various strains and mutants of HIV/SIV"International Journal of Molecular Medicine. (in press).
