二酸化窒素様活性窒素種の心血管系組織からの発生機序とその制御に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370120
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 荻野 景規 金沢大学, 医学系研究科, 教授 (70204104)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中村 裕之 高知大学, 医学部, 教授 (30231476) ; 神林 康弘 金沢大学, 医学系研究科, 講師 (20345630) ; 加藤 昌志 金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (10281073)
• Keywords: 心筋細胞 / 亜硝酸 / NO / ニトロ化 / ニトロチロシン / ペルオキシダーゼ / 虚血 / 心筋梗塞

Research Abstract

ラット心臓に、ペルオキシダーゼ活性により亜硝酸(NO_2^-)を二酸化窒素(NO_2)に酸化する蛋白質としてヘモグロビンとミオグロビンを同定した。また、凍結切片を用いて蛋白質チロシンのニトロ化を抗ニトロチロシン抗体で免疫染色を行うと、比較的低濃度(5〜10μM)のH_2O_2、NO_2^-で心筋細胞に局在が認められ、未知のペルオキシダーゼ活性を有した蛋白の存在が示唆された。そこで、蛋白変性剤を用いない二次元電気泳動後のニトロ化によるウエスタンブロット法を用いた新しい蛋白分離同定法を確立した。還元剤下では、ヘモグロビンはサブユニットに分かれ、その場合、チロシンニトロ化に関する高いペルオキシダーゼ活性を有していることが判明した。しかしながら、自然のヘモグロビン及びミオグロビンのチロシンニトロ化作用に必要なH_2O_2、NO_2^-はmM濃度であり、ヘモグロビンの分子変化の関与は不明である。一酸化窒素合成酵素(NOS)に依存しないNOの産生や非酵素的NO産生が、低酸素、pH5.5の条件で認められるので、ペルオキシダーゼを介したNO_2^-からNO_2の産生の関与を否定できない。現在、ラット虚血心又虚血再緩流後の心筋梗塞病変を用いて未知のペルオキシダーゼ活性を有する蛋白を検索中である。

Research Products

• [Publications] Kato M, Takeda K, Kawamoto Y, Tsuzuki T, Hossain K, Tamakoshi A, Kunisada T, Kambayashi Y, Suzuki H, Ogino K, Takahashi M, Nakashima I: "c-Kit-Targeting Immunotherapy for Hereditary Melanoma in a Mouse Model"Cancer Res. 64・3. 801-806 (2004)
• [Publications] Nakamura H, Matsuzaki I, Hatta K, Nobukuni Y, Kambayashi Y, Ogino K: "Nonthermal effects of mobile-phone frequency microwaves on uteroplacental functions in pregnant rats"Reprod Toxicol. 17・3. 321-326 (2003)
• [Publications] Kambayashi Y, Tero-Kubota S, Yamamoto Y, Kato M, Nakano M, Yagi K, Ogino K: "Formation of superoxide anion during ferrous ion-induced decomposition of linoleic acid hydroperoxide under aerobic conditions"J Biochem. 134・6. 903-909 (2003)
• [Publications] Kambayashi Y, Ogino K: "Reestimaton of Cypridina luciferin analogs (MCLA) as a chemiluminescence probe to detect active oxygen species -cautionary note for use of MCLA-"J Toxicol Sci. 28・3. 139-148 (2003)
• [Publications] Nakamura H, Miyagawa K, Ogino K, Endo T, Imai T, Ozasa K, Motohashi Y, Matsuzaki I, Sasahara S, Hatta K, Eboshida A: "High contribution contrast between the genes of eosinophil peroxidase and IL-4 receptor α-chain in Japanese cedar pollinosis"J Allergy Clin Immunol. 112・6. 1127-1131 (2003)
• [Publications] Kodama N, Kambayashi Y, Kubo M, Yoneyama S, Nobukuni Y, Nakamura H, Ogino K: "Induction of eosinophil peroxidase and nitrotyrosine formation in a human leukemia cell line, EoL-1"Cell Biochem Funct. (in print).
• [Publications] 荻野 景規: "環境化学物質の代謝とその周辺"財団法人 日本公衆衛生協会. 11 (2003)