Wiskott-Aldrich症候群責任遺伝子WASPと会合する新規分子の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370243
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 梶原 道子 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助手 (40280979)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 野々山 恵章 防衛医科大学校, 小児科, 教授 ; 峯岸 克行 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (10343154)
• Keywords: Wiskott-Aldrich症候群 / WASP / Integrin / 血小板

Research Abstract

我々は、Wiskott-Aldrich症候群患者50人を、その原因遺伝子WASPを解析することにより遺伝子診断し、臨床像を検討した。その結果、血小板機能低下による出血症状が予後不良因子である事を示した。
そこで、WASP異常により血小板の機能低下が起きる機構を検討した。WASPがCIB(calcium integrin binding protein)と結合することを見出した。CIBは接着因子αIIbβ3インテグリンと結合する分子である。αIIbβ3は血小板に特異的に発現し、血小板凝集において中心的な役割を果たしている。血小板をトロンビン刺激すると、WASPとCIBは結合してWASP-CIB複合体を形成することが、免疫沈降による解析で明らかになった。そこで、CIBのN末端部分のペプチドを合成して血小板に導入し、WASP-CIB複合体形成を阻害したところ、血小板はαIIbβ3のリガンドであるFibrinogenとの結合が低下した。また活性化αIIbβ3を認識する抗体であるPAC-1による染色が低下した。すなわち、WASP-CIB複合体形成がαIIbβ3の活性化に重要な役割を果たしていると考えられた。次に、WAS/XLT患者で見られる変異を持ったWASPタンパクを作製し、CIBとの結合を検討したところ、変異WASPはCIBとの結合が低下していた。また、WAS/XLT患者血小板のトロンビン刺激後のPAC-1発現を検討したところ、著明に低下していた。すなわち、変異WASPはCIBと結合できず、WASP-CIB複合体が形成されず、その結果αIIbβ3が活性化できない事が明らかになった。以上の結果から、Wiskott-Aldrich症候群患者で見られる血小板機能低下は,接着因子αIIbβ3活性化障害が関与していると考えられた。

Research Products

• [Publications] Imai K, Kajiwara M(6番目), et al.: "Clinical course of patients with WASP gene mutations."Blood. 103. 456-464 (2004)
• [Publications] Imadome K, Shirakata M, Shimizu N, Nonoyama S, Yamanashi Y.: "CD40 ligand is a critical effector of Epstein-Barr virus in host cell survival and transformation."Proc Natl Acad Sci U S A. 100. 7836-7840 (2003)
• [Publications] Imai K, Nonoyama S, (5番目), et al.: "Human uracil-DNA glycosylase deficiency associated with profoundly impaired immunoglobulin class-switch recombination."Nature Immunol. 4. 1023-1028 (2003)
• [Publications] Ta VT, Nonoyama S(7番目), et al.: "AID mutant analyses indicate requirement for class-switch-specific cofactors."Nature Immunol. 4. 843-848 (2003)
• [Publications] Jo EK, Nonoyama S(9番目), et al.: "Mutational analysis of the WASP gene in 2 Korean families with Wiskott-Aldrich syndrome."Int J Hematol. 78. 40-44 (2003)
• [Publications] Imai K, Nonoyama S, Ochs HD: "WASP (Wiskott-Aldrich syndrome protein) gene mutations and phenotype."Curr Opin Allergy Clin Immunol. 3. 427-436 (2003)