発作性夜間ヘモグロビン尿症の造血異常関与遺伝子の解明と遺伝子治療法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370299
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 谷 憲三朗 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (00183864)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 牟田 浩実 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (40325478) ; 浅野 茂隆 東京大学, 医科学研究所, 教授 (50134614) ; 中熊 秀喜 和歌山県立医科大学, 教授 (90207746)
• Keywords: VSV-Gシュードタイプレンチウイルスベクター / 臍帯血CD34細胞 / GFP遺伝子 / 発作性夜間血色素尿症 / PIG-A遺伝子 / K562細胞株 / Musashi1 / NOD / SCID

Research Abstract

1)VSV-Gシュードタイプレンチウイルス(HIV)ベクターを用いた高遺伝子導入法の開発:新規HIVベクターを用いて各種白血病細胞株ならびにヒト臍帯血CD34細胞へのGFP遺伝子導入を行い、コロニーレベルでの遺伝子導入効率を対照ベクターと比較検索した結果から、本ベクターではほぼ100%のコロニーへの遺伝子導入が可能であり、その高い遺伝子導入効率はGFP遺伝子が標的細胞の染色体に100%インテグレーションされているためであることを明らかにした。
2)発作性夜間血色素尿症(PNH)におけるPIG-A遺伝子導入で補正できない表現型に関する解析:PNHにおける血小板減少症の原因は不明な点が多い。GPIアンカー型膜分子欠失K562細胞株(変異K562細胞)では巨核球系マーカーのCD41とCD61の発現が抑制されており、PIG-A遺伝子導入によりこれらの発現は回復しない。この原因を明らかにする目的でRNA結合タンパク質遺伝子に特に注目し、ROD1、NHP2、hnRNPA1・E2、Musashi1の発現をRTPCRにより解析した結果、Musashi1の発現異常を認めた。Musashi1遺伝子を変異K562細胞に導入したところPMA刺激下でのCD61発現が回復した。以上よりMusashi1のK562細胞の巨核球系分化への関与が示唆された。
3)PNH遺伝子治療前臨床研究:PNH患者に対する遺伝子治療開発の前臨床研究としてPNH患者骨髄細胞へのPIG-A遺伝子導入を行いNOD/SCIDマウスに移植後その遺伝子導入効果を観察する研究計画が、九州大学病院ならびに熊本大学医学部附属病院倫理審査委員会において平成15年8月に認可された。その後PIG-A-HIVベクターを作製し、変異K562細胞でのPIG-A遺伝子導入効果を確認できた。

Research Products

• [Publications] Kojima, T., Tani, K., et al.: "Tumor-derived Gp96 combined with GM-CSF gene-transduced tumor cells inhibit tumor growth in mice through migration and maturation of CD11c+ cells"Human Gene Therapy. 14. 715-728 (2003)
• [Publications] Yoshida, Y., Tani, K., et al.: "Mice lacking a transcriptional corepressor Tob are predisposed to cancer"Gene Dev. 17. 1201-1206 (2003)
• [Publications] Oshima, K., Tani, K., et al.: "Maxizymes and Small Hairpin-type RNAs that are driven by a tRNA promoter specifically cleave a chimeric gene associated with leukemia in vitro and in vivo"Cancer Res. 63. 6809-6814 (2003)
• [Publications] Soda, Y., Tani, K., et al.: "A novel Maxizyme vector targeting a bcr-abl fusion gene induced specific cell death in Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia"Blood. (in press). (2004)
• [Publications] Izawa, K., Tani, K., et al.: "Hematopoietic Activity of Common Marmoset CD34 Cells Isolated by a Novel Monoclonal Antibody MA24"Exp Hematology. (in press). (2004)
• [Publications] Takashi, H., Tani, K., et al.: "Suppression of megakaryocytic differentiatio of GPI-anchored protrein deficient K562 cells, and recovery from the suppression by Musashi1"第26回日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集. 626 (2003)
• [Publications] 谷 憲三朗 編: "遺伝子治療の方向性-新たな治療ベクターへの挑戦"先端医学社. 135 (2003)