バセドウ病を発症した抗TSH受容体抗体遺伝子導入マウスによる病因解明と応用研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370326
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 赤水 尚史 京都大学, 医学研究科, 助教授 (20231813)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 生田 宏一 京都大学, 医学研究科, 教授 (90193177)
• Keywords: バセドウ病 / 甲状腺機能亢進症 / トランスジェニックマウル / TSHレセプター / TSHレセプター抗体

Research Abstract

バセドウ病は抗TSHレセプター抗体(TRAb)によって惹起される臓器特異的自己免疫疾患であるがその作用機序や産生機構についてはほとんど解明されていない。一方我々はバセドウ病患者のリンパ球からTRAb産生B細胞クローンを単離・解析してきた。本研究では,TRAbの作用機序,産生機構を内分泌学的・免疫学的に解明するために,TRAb遺伝子導入トランスジェニックマウス(TG)を作製した。刺激型TRAb産生B細胞クローンであるB6B7クローンのリンパ球ゲノム遺伝子から,プロモーター及びイントロンエンハンサーの領域を含むHeavy chainとLight chainを単離し,IgM型DNAコンストラクトを作製した。同DNAをC57BL/6Jマウスにマイクロインジェクションし,TGを作製した。サザンブロット法によって遺伝子導入を確認した5系統において,分泌型・膜型のヒトIgMの発現を確認した。昨年度から本年度にかけてはこれらTGの内分泌学的機能解析を行った。すなわち、12-16週齢のTG(n=74)とNTG(n=38)の血清中のfT4とTSHの濃度を測定では、fT4;TG2.1±0.63ng/dl(mean±SD),NTG1.2±0.30ng/dl:TSH;TG1.3±1.2ng/ml,NTG4.4±2.2ng/mlと有意な差がみられた(P<0.0001)。TGで,fT4とヒトIgM(相関孫数(r)=0.507)の相関が見られ(P<0001),N=51(69%)にhyperthyroidismが認められた。^<99m>technetium pertechnetate甲状腺摂取率では、120分値(peak値);TG(n=3)16.4±3.14%,NTG(n=3)7.8±0.644%と有意な差が見られ(P<0.001),planer像でもuptakeの差が認められた。さらに、本年度はTGの免疫学的機能解析を行い、末梢血、骨髄、脾臓のいづれにおいてもB細胞数の減少が認められ、自己寛容の成立が示唆された。また、lipopolysaccharide(LPS)投与によって同病の発症が引起され、環境因子の摂与が示唆された。

Research Products

• [Publications] Saijo M: "Generation of a transgenic animal model of hyperthyroid Graves disease"Eur J Immunol. 33. 2531-2538 (2003)
• [Publications] Akamizu T: "Association study of autoimmune thyroid disease at 5q23-q33 in Japanese patients"J Hum Genet. 48・5. 236-242 (2003)
• [Publications] Hataya Y: "Alterations of Plasma Ghrelin Levels in Rats with Lipopolysaccharide-Induced Wasting Syndrome and Effects of Ghrelin Treatment on the Syndrome"Endocrinology. 144・12. 5365-5371 (2003)
• [Publications] Akamizu T: "Central effects of ghrelin and growth hormone secretagogue. Pituitary and Periphery : Communication in and out"Ed CJ strasburger. 3-15 (2003)
• [Publications] Moriyama K: "Recombinant monoclonal thyrotropin-stimulation blocking antibody (TSBAb) established from peripheral lymphocytes of a hypothroid patient with primaty myxedema"J Endocrinol.Invest.. 26. 1076-1080 (2003)
• [Publications] Li YS: "Transgenic Mice Producing MHC Class Molecules on Thyroid Cells Do Not Develop Apparent Autoimmune Thyroid Diseases"Endocrinology. (in press). (2004)
• [Publications] 赤水尚史: "モデル動物作製によるバセドウ病発症機序の解明"J.Clin.Immunol. 26・6. 329-335 (2003)
• [Publications] Akamizu T: "Monoclonal Antibodies to Thyroid Specific Autoantigens"Endocrinology. 36・6-7. 361-366 (2003)
• [Publications] 赤水尚史: "最新医学"Basedow病の動物モデル作製-抗甲状腺刺激ホルモン受容体抗体遺伝子発現法-. 6 (2003)
• [Publications] 赤水尚史: "内分泌・糖尿病科"実験的バセドウ病. 5 (2003)