2002 Fiscal Year Annual Research Report
脳損傷修復効果を示すプロテオグリカン機能ドメインの同定と作用機序の解析
| Project/Area Number |
14370449
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
|
| Research Institution | Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center |
|---|
Principal Investigator |
大平 敦彦 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 部長 (20101074)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松井 ふみ子 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 助手
時田 義人 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 研究員 (50291175)
|
|---|
| Keywords | 脳損傷 / 虚血 / 低酸素 / プロテオグリカン / コンドロイチン硫酸 / NGC / 神経前駆細胞 / 新生児 |
|---|
| Research Abstract |
本研究の目的は、中枢神経系に特異的に発現し、上皮増殖因子(EGF)様構造を持つ膜貫通型コンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるNGCについて、神経保護活性やグリア性細胞の機能調節活性などの生理機能を明らかにし、それをもとに、脳機能障害の治療への新たな道を拓くことである。初年度は、NGCの細胞外ドメインを、大腸菌および哺乳動物細胞で発現させるための遺伝子構造体の作製と、生理機能解析のための培養系および脳損傷モデルラットの作製を行った。それぞれの詳細は次のとおりである。
1.遺伝子構造体の作製
NGCの細胞外ドメインには、1本のコンドロイチン硫酸糖鎖が共有結合している。このコンドロイチン硫酸部分はNGCの生理機能に関与していることが考えられる。したがって、哺乳動物細胞で発現させる場合には、コンドロイチン硫酸鎖導入部位のセリンをアラニンに変異させた遺伝子構造物と正常なNGC細胞外ドメインを発現するものの両方を作製した。また、発現タンパクの精製や検出に利用するため、GST-tagあるいはStrep-tagを持つ融合タンパクが発現するようにした。現在、大腸菌を用いて、目的分子の発現と精製を行っている。
2.生理機能解析系の確立
2つの系が使えるようになった。第1は、神経前駆細胞に対する作用を解析するためのニューロスフェアー培養である。これは、胎生14日齢ラッ卜終脳由来細胞をbFGFとEGF存在下で培養する方法である。第2は、新生児低酸素虚血モデルラットである。生後7日齢ラットの右総頚動脈閉塞後、8%という低濃度酸素下に90分置くことで作製した。
|
Research Products
(6 results)
-
[Publications] Masaru Inatani et al.: "Spatiotemporal expression patterns of N-syndecan, a transmembrane heparan sulfate preteoglycan, in developing retina"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41(5). 1616-1621 (2002)
-
[Publications] Seiji Miyata et al.: "Chondroitin sulfate proteoglycan phosphacan/RPTP in the hypothalamic magnocellular nuclei"Brain Research. 949(1-2). 112-121 (2002)
-
[Publications] Fumiko Matsui et al.: "Transient expression of juvenile-type neurocan by reactive astrocytes in adult rat brains injured by kainate-induced seizures as well as surgical incision"Neuroscience. 112(4). 773-781 (2002)
-
[Publications] Yoko Toba et al.: "Expression and immunohistochemical localization of heparan sulfate proteoglycan N-syndecan in the migratory pathway from the rat olfactory placode"Europian Journal of Neuroscience. 15(9). 1461-1473 (2002)
-
[Publications] Sinobu Tamauchi et al.: "Phosphorylation of neuroglycan C, a brain-specific transmembrane chondroitin sulfate proteoglycan, and its localization in the lipid rafts"Journal of Biological Chemistry. 277(23). 20583-20590 (2002)
-
[Publications] Kazunori Sango et al.: "Phosphacan and neurocan are repulsive substrates for adhesion and neurite extension of adult rat dorsal root ganglion neurons in vitro"Experimental Neurology. (in press). (2003)
