2003 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
14370458
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Research Institution | Toyama Medical and Pharmaceutical University |
Principal Investigator |
木村 友厚 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (80167379)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
脇谷 滋之 信州大学, 医学部, 講師 (70243243)
松下 功 富山医科薬科大学, 附属病院, 助手 (80345587)
森田 裕司 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (30313604)
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Keywords | 軟骨 / 修復 / 遺伝子 / コラーゲン / 転写因子 |
Research Abstract |
XI型コラーゲンα2鎖遺伝子(Col11a2)のプロモーター中の24-bpの軟骨特異的cis-elementの塩基配列をbaitに用い,その3´側および5´側を含む2種のDNAアフィニティーカラムを作成した.これに軟骨分化前後の間葉系細胞(N1511),およびRCS細胞の核および細胞質よりの抽出液をかけ,結合蛋白をSDS-PAGE解析した結果,分化前後で出現あるいは逆に消失する5種のバンドを得た.このバンドを部分精製し,LS-MS/MS解析を行い,そこで得られた配列からゲノムデータベースをサーチした.その結果,各バンドから複数の候補遺伝子を得たが,これらの中にRNA合成に関わる遺伝子に加え,転写制御に関連する可能性のある候補遺伝子を得た.一方,軟骨分化制御関連遺伝子の一つであるCDMP1を用いた関節軟骨修復促進研究を続けて施行した.家兎の自家骨髄から穿刺にて得た未分化間葉系幹細胞,(BMMC)を培養し,この細胞にex vivoでCDMP-1遺伝子を導入した後に,膝関節内に作成した関節軟骨全層欠損部にコラーゲン担体に包埋して移植し軟骨修復を図った.長期観察の結果,CDMP-1遺伝子導入BMMCの自家移植により,家兎の全層軟骨欠損の修復は良好なものとなった.特に従来は充分な再生が.困難であった関節軟骨表層に至る硝子軟骨による修復とリモデリングが良好で,再生軟骨はII型コラーゲンに富み,マトリックスの微細構築の再建も良好であった.経時的に深層部は軟骨下骨に置換され,また周囲軟骨とのintegrationも良好となった.さらに予備的ではあるが,同細胞を高密度に関節腔内に移注する投与方法により,軟骨欠損・損傷部への取り込みと修復促進効果が見られる結果を得はじめている.
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Katayama R, et al.: "Efficient gene delivery to articular cartilage using electroporation"Modern Rheum. 13. 243-249 (2003)
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[Publications] Matsui Y, et al.: "Cartilage-specific overexpression of C-propeptide of type II collagen affected matrix mineralization in transgenic mice"J Musculoskel Res. 7. 183-189 (2003)
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[Publications] Ishii Y, et al.: "ATBF1-A protein, but not ATBF1-B, is preferentially expressed in developing rat brain"J Comp Neurol. 465. 57-71 (2003)