| Research Abstract |
(目的)メカニカルストレス(MS)がどの分化段階の軟骨細胞に作用し,骨化を促進させるのかを明らかにするために,ATDC5細胞を用いて,軟骨の分化とMSに対する反応を検討した.(方法)ATDC5細胞を4.2×7.5cmのプラスチックプレートに1×106cell/plateの密度で37℃,5%CO2存在下に培養した.培養開始後4,7,14,21,28,42日目に細胞の分化段階を確認し,培養液中でプラスチックプレートを4点曲げて彎曲させる方法によってMS(0.5Hz,4200μstrain)を負荷し,負荷開始後1,6,12,24時間の時点でのMSの効果をトルイジンンブルー,アルシアンブルー染色,ALP染色とノーザンプロット法を用いて確認した.ノーザンプロット法ではII型,X型コラーゲン,アグリカン,ALP, PTH/PTHrP receptor, osteopontin mRNA発現量を確認し,どの分化段階で最も強く反応したのかを検討した.また,ヒアルロン酸(HA)の効果を確認するために,HA 1mg/ml添加培養液を用いて同様の実験を行った。(結果)ATDC5細胞は,培養開始後4日目に凝集領域,7日目に軟骨結節,21日目に肥大型細胞を認めた.培養開始後4,7日目ではMSの効果は認められなかった.しかし,培養開始後14日目よりMSによるII型,X型コラーゲン,アグリカンmRNAの発現増加が認められ,特に,X型コラーゲンは分化に伴い,MSによる反応性の増大を認めた。ALP, PTH/PTHrP receptor, osteopontinでは発現量の変化は明らかでなかった.HAの添加はMSによる反応性を減弱させた.(考察と結論)ATDC5細胞は分化段階の違いによりMSへの反応性を変化させた.HAはMSの効果を減弱させた.
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