ペルオキシレドキシンIノックアウトマウスによる口腔癌リンパ節転移の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370656
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 吉田 廣 筑波大学, 臨床医学系, 教授 (80014330)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柳川 徹 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10312852) ; 石井 哲郎 筑波大学, 社会医学系, 教授 (20111370) ; 山本 雅之 筑波大学, 基礎医学系, 教授 (50166823)
• Keywords: ペルオキシレドキシン / ノックアウトマウス / ジーントラップ / MSP23

Research Abstract

本年度は以下の要領で研究を進めた。
ジーントラップ法によりMolony白血病ウイルスベクターを介して遺伝子内のエクソンにランダムに挿入されたクローンの選択をオムニ社のデータベース上で検索をおこなったところ、その中でMSP23=マウスペルオキシレドキシンI(Prx I)のエクソン3と4の間に部分に変異の入ったES細胞が存在することが確認された。このクローン(OST4226)を選択し、交配後のメスマウスの子宮から取り出したブラストシストにインジェクションをおこない、偽妊娠させたICRマウスの子宮内にシストブラストを移植しキメラマウスを得た。このオスのキメラマウスにOYC-22マウスをかけ合わせ、ヘテロマウスを製作した。これらをかけ合わせ、ノックアウトホモマウスを完成させた。さらに、C57/B6マウスへのバッククロスを開始し、バックグラウンドの統一を始めた。ジェノタイプの決定はPCRでおこなうこととし、次年度からの実験に使用するノックアウトマウスについては、おおよその準備が整った。
一方、Prx Iノックアウトマウス誕生までの間を利用して、Prx Iマウス誕生後の解析の基礎的実験として、すでに誕生している、Prx Iの上流に存在する転写因子Nrf2によって同時に制御をうけているストレスタンパク質A170のノックアウトマウスのフェノタイプの検索をおこなった。フェノタイプは30週過ぎから高率に脂肪組織が見いだされることを発見した。またA170などのストレスタンパク質の動態をユビキチン化の観点からの検討を加え、Prx Iマウスの実験の基礎とした。