2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14380336
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
竹居 孝二 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (40322226)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山田 浩司 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (80325092)
絹田 正裕 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (40135942)
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| Keywords | エンドサイトーシス / リポソーム / 神経 / 脳 / イノシトールリン脂質 / PIP_2 / 無細胞系 / 小胞輸送 |
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| Research Abstract |
エンドサイトーシスの機構に関して、以下を明らかにした。
1)Amphiphysin 1ノックアウトマウス脳細胞質を用いた解析
エンドサイトーシス解析のために、リポソームをATP、GTP存在下に脳細胞質と反応させ、形成される小胞を定量化するin vitro実験系を確立している。この実験系で、Amphiphysin 1ノックアウトマウス脳細胞質ほとんど小胞を形成せず、精製Amphiphysin 1をadd backすると小胞形成能は回復した。これによりAmphiphysin 1はエンドサイトーシス小胞形成に必須であることを示した。
2)Amphiphysin 1、Dynamin 1の脱リン酸化、リン酸化
Dynamin 1、Amphiphysin 1は、シナプス刺激により脱リン酸化され、cyclin-dependent kinase5(CDK5)によりリン酸化されることが報告されている。そこで、このリン酸化、脱リン酸化による小胞形成への影響を調べた。リポソームをGTP存在下に脱リン酸化Amphiphysin 1、Dynamin 1と反応すると、小胞が多数形成されたが、CDK5によりリン酸化されたAmphiphysin 1、Dynamin 1では小胞形成はほとんどみられなかった。また、Dynamin 1、Amphiphysin 1の相互作用は脱リン酸化により促進した。これらのことから、Dynamin 1、Amphiphysin 1のCDK5依存性リン酸化がエンドサイトーシス調節機構のひとつであることが示唆された。
3)Dynamin 2、Dynamin 3の局在
Dynamin 2、Dynamin 3は精巣に高発現することから、精巣組織、精巣セルトリにおける局在を調べた。セルトリ細胞で異なる細胞内局在を示したことから、これらのアイソフォームが異なる機能を持つ可能性が示唆された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] A.Kamitani: "Dstribution of dynamins in testis, and their possible relation to sperm autogenesis"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 294. 261-267 (2002)
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[Publications] H.Yamada: "Norepinephrine-evoked 5-Hydroxytryptamine secretion is Ca^<2+> dependent and mediated through exocytosis in rat pinealocytes"J.Neurochem. 81. 533-540 (2002)
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[Publications] K.Tomizawa: "Gdk5/P35 regulates neurotransmitter release through phosph orylation and downregulation of P/Q-type voltage-dependent calcium channel activity"Journal of Neuroscience. 22. 2590-2597 (2002)
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[Publications] Kinuta Masahiro: "Phosph atidylinositol 4,5-bisphosphate stimulates vesicle formation from liposomes by brain cytosol"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 2842-2847 (2002)
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[Publications] M.Kinuta: "Utilization of liposomes in besicular transport studies. Cell Structure and Function"Cell Structure and Function. 27. 63-69 (2002)
