成熟マウス大脳皮質に潜む未分化細胞の同定とその運命

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14380357
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 桑野 良三 新潟大学, 腦研究所, 助教授 (20111734)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮下 哲典 新潟大学, 腦研究所, 助手 (60323995)
• Keywords: コクサッキーウイルス / アデノウイルス / 受容体 / 大脳皮質 / 細胞接着因子 / 免疫組織化学 / 幼弱ニューロン

Research Abstract

脳形成にかかわり成熟と共に消失する膜蛋白を探索するため、発達時期や部位に左右されない機能ユニットである神経成長円錐の構成膜タンパクを網羅的に分析した。成長円錐構成膜タンパクのペプチド断片130種以上について部分アミノ酸配列を決定した。データベース検索で新規ペプチドに焦点を絞り、これらのペプチドに対する抗体を作製しWestern分析の結果、マウス初期胚から新生児まで急激に増加し生後は段階的に減少する膜タンパクgmp46/CAR(Growth cone Membrane Protein with a molecular mass 46 kDaはCoxsakievirus Adenovirus Receptorと同一タンパクと判明)を発見した。部分アミノ酸配列を基に全長cDNAをクローニングし、gmp46/CARは1回膜貫通型の糖タンパクであるイムノグロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子であることを証明した。免疫組織化学的検索の結果、gmp46/CARは圧倒的に神経系に発現し、胎生6.5日の神経管上皮細胞の膜に、神経発生が進むと突起伸長中のニューロンに繊維状に観察された。このように幼弱なニューロンに強く発現していることから顕微鏡レベルで分布を観察したところ、成体でもSubventricular Zone(SVZ)、Rostral Migratory Stream(RMS)及びDentate Gyrus(DG)の一部の細胞に発現していた。よく見ると、大脳皮質にもgmp46/CAR陽性細胞が点在していた。これらの結果を踏まえて、gmp46/CARの機能と発現局在との関連を詳細に観察するために、gmp46/CARの細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、C末端のペプチドに対する抗体を作製した。

Research Products

• [Publications] Y.Hotta: "Developmental distribution of Coxsackie virus and adenovirus receptor localized in the nervous system"Developmental Brain Research. (in press).
• [Publications] T.Ito: "Coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR)-positive immature osteoblasts as targets of adenovirus-mediated gene transfer for fracture healing"Gene Therapy. (in press).
• [Publications] H.Kawashima: "Expression of the coxsackievirus and adenovirus receptor in musculoskeletal tumors and mesenchymal tissues : efficacy of adenoviral gene therapy for osteosarcoma"Cancer Science. 94. 70-75 (2003)