2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14380373
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
遠藤 昌吾 理化学研究所, 神経回路メカニズム研究グループ, 上級研究員 (60192514)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
ローニー トーマス 理化学研究所, 記憶学習機構研究チーム, 研究員 (30322704)
池田 敏男 理化学研究所, 行動遺伝学技術開発チーム, 研究員 (80252526)
瀧嶋 邦夫 防衛医科大学校, 生化学第一講座, 教授
佐藤 泰司 防衛医科大学校, 生化学第一講座, 助手
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| Keywords | MAPキナーゼ / 核内移行 / 遺伝子欠損マウス / IoxP / Cre / ERK2 |
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| Research Abstract |
本研究はMAPK(mitogen activated protein kinase)に属するERK2(extracellular signal regulated kinase)の生理機能を明らかにすることを目的とし、ERK2の核移行機構の解析と、ERK2結合タンパク質の解析、および、ERK2遺伝子欠損マウスの作出などを行い、以下の結果を得た。
ERK2の各種変異体の解析を行い、ERK2の受動的な拡散による核内移行においてもタンパク質間相互作用が存在する知見を得るとともに、ERK2における相互作用部位を同定した。また、各種刺激に伴うERK2の活性化と核移行を解析するために、同時にリアルタイムで解析できる系を開発した。酵母2-ハイブリッドシステムを用いて得られたERK2に結合する新規タンパク質について特徴付けを行ったが、核移行に関与するタンパク質は含まれなかった。
細胞膜局在型ERK2およびその変異体を細胞に発現させ、基礎的な解析を行った。ERK2遺伝子欠損P19細胞作製のため、片方の対立遺伝子におけるターゲッティングベクターの相同組換えクローンのスクリーニングを行った。今後、もう片方の対立遺伝子についても同様の操作を行う予定である。
全ての細胞で発現が観察されているERK1とERK2は90%以上の相同性を持ち、お互いにその機能を補うと考えられることから、遺伝子欠損による機能解析のためには両遺伝子を欠損したマウスの作出が必要である。本研究ではERK1遺伝子を欠損したマウスにさらにIoxP配列でERK2遺伝子を囲んだマウスを作出した。このマウスは組み替え酵素Creを発現するマウスと交配することにより、Creを発現する細胞のみでERK2を欠損させることができる。今後このマウスを様々なCre発現マウスと交配し、ERK2の機能解析を行う予定である。
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[Publications] H.Nishiyama, et al.: "Glial protein S100b modulates long term neuronal plasticity"Proc.Nail.Acad.Sci.. 99. 4037-4042 (2002)
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[Publications] S.Endo et al.: "Thr123 of rat G-substrate contributes to its action as a protein phosphatase inhibitor"Neurosci.Res.. (in press).
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[Publications] Q.-L.Li et al.: "Causal relationship between the loss of RUNX3 expresson and gastric cancer"Cell. 109. 113-124 (2002)
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[Publications] T.Nakashiba et al.: "Complementary expression and neurite outgrowth activity of netrin-G subfamily members"Machanisms of Development. 111. 47-60 (2002)
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[Publications] S.Shibayama, et al.: "Identification of a C-terminal region that is required for the nuclear translocation of ERK2 by passive diffusion"J.Biol.Chem.. 277. 37777-37782 (2002)
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[Publications] N.Sugiura, K.Takishima: "Interaction of NF-Y with the 3'-flankning DNA sequence of the CCAAT box"FEBS Lett.. (in press).
