2002 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
14560076
|
|---|
| Research Institution | Osaka Prefecture University |
|---|
Principal Investigator |
荒井 基夫 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 教授 (80081537)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川口 剛司 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 助教授 (70195056)
|
|---|
| Keywords | セルラーゼ / セルロース / 遺伝子 / アルコール |
|---|
| Research Abstract |
セルロース性物質は地球上で最も大量に存在する有機物質資源であり、これをアルコールなどの有用物質に転換する研究が重要である。これらを利用するためには、まず加水分解して単糖にまでしなければならない。このために、セルラーゼが重要である。セルラーゼは複合酵素であり、1種頚では分解力を示さないが、複数の酵素を混合すると相乗効果が現れ、強い活性をします。本研究はカビのセルラーゼ遺伝子のいくつかを、酵母に導入して、セルロース性物質から直接アルコールを作ることを目的としている。酵母自体はセルラーゼ遺伝子を持っていないからである。著者はこれまで、Aspergillus aculeateusの培養液から多種頚のセルラーゼ、ヘミセルラーゼを精製し、諸性質を明らかにした。ついで、このらの酵素の遺伝子のクローニングを行ってきた。
まず、エンド型酵素2種類、エキソ型酵素2種類、β-グルコシダーゼ1種類の遺伝子の発現ベクターを構築した。1つのベクターに酵母用プロモーター、1種類のセルラーゼ遺伝子(cDNA)さらに選択マーカーとして、宿主の栄養要求性を相補する陰電子を挿入した。プロモーターとしてはホスホグリセリン酸キナーゼプロモーターを用いた。完成した発現ベクターを複数の栄養要求性のある酵母に、エレクトロポレーション法で導入し、選択培地で生育させた。その結果、エンド型酵素2種類は活性を検出できた。つぎに、エンド型酵素2種類を同時に多量発現させる系を構築したところ、同時発現に成功した。一方、エキソ型酵素とβ-グルコシダーゼbについては、活性を検出については、現在検討中である。
|
