細胞膜裏打ち蛋白質ビネキシンの生理機能の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14560287
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 木岡 紀幸 京都大学, 農学研究科, 助教授 (90234179)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 植田 和光 京都大学, 農学研究科, 教授 (10151789) ; 松尾 道憲 京都大学, 農学研究科, 助手 (00335308)
• Keywords: 細胞接着 / 足場依存性 / ビンキュリン / ビネキシン / 細胞骨格 / アクチン

Research Abstract

接着斑裏打ち蛋白質ビネキシンはCAP(c-Cb1 associated protein)/ポンシン、ArgBP2(Arg Binding protein 2)とファミリーを形成しており、これらはいずれも細胞骨格の制御と増殖因子シグナル伝達系の制御に関与している。これらの分子はN末側にソルビン相同(SoHo)領域と呼ばれる保存された領域を持つ。SoHo領域はアクチン細胞骨格の制御に関わる可能性が考えられているが、その機能はよくわかっていない。今回ビネキシンの生理機能を明らかにするために、SoHo領域をベイトとしたTwo-hybrid法を行った。得られた陽性クローンのうち2クローンはαアクチン断片をコードする遺伝子であり、SoHo領域がアクチン結合ドメインとして機能していることが示唆された。ビネキシンSoHo領域とアクチン断片との結合はGST-SoHo領域を用いたin vitro結合実験(プルダウンアッセイ)、およびin vivo結合実験(免疫沈降実験)によっても確認できた。さらにビネキシンSoHo領域とF-アクチンとの結合をF-アクチン共沈実験により確認したところ、アクチン約5分子に1分子の割合でビネキシンSoHo領域とF-アクチンが結合することが明らかとなった。<BR>ビネキシンのSoHo領域とCAP/ポンシン、ArgBP2のSoHo領域はそれぞれ34%、69%の相同性を持っていることから、他のSoHo領域もF-アクチンと結合する可能性があると考え、CAP/ポンシン、ArgBP2のGST-融合SoHo領域を用いてF-アクチン共沈実験を行った。その結果、CAP/ポンシン、ArgBP2いずれのSoHo領域もF-アクチンと結合することが明らかとなり、SoHo領域の機能の一つはアクチンとの結合にあることが示された。

Research Products

• [Publications] Wakabayashi, M., Ito, T., Mitsushima, M., Aizawa, S., Ueda, K., Amachi, T., Kioka, N: "Interaction of lp-dlg/KIAA0583, a membrane-associated guanylate kinase family protein, with vinexin and beta-catenin at sites of cell-cell contact"J Biol Chem. 278. 21709-21714 (2003)
• [Publications] Townson, S., Dobrzycka, K.M., Lee, A.V., Air, M., Deng, W., Kang, K., Jiang, S., Kioka, N., Michaelis, K., Oesterreich, S.: "SAFB2 - A new SAFB homolog and estrogen receptor corepressor"J Biol Chem. 278. 20059-20068 (2003)
• [Publications] Umehara, H., Nishii, Y., Morishima, M., Kakehi, Y., Kioka, N., Amachi, T., Koizumi, J., Hagiwara, M., Ueda, K: "Effect of cisplatin treatment on speckled distribution of a serine/arginine-rich nuclear protein CROP/Luc7A"Biochem Biophys Res Commun. 301. 324-329 (2003)
• [Publications] Tanaka, A.R., Abe-Dohmae, S., Ohnishi, T., Aoki, R., Morinaga G., Okuhira, K., Ikeda, Y., Kano, F., Matsuo, M., Kioka, N., Amachi, T., Murata, M., Yokoyama, S., Ueda, K.: "Effects of mutations of ABCA1 in the first extracellular domain on subcellular trafficking and ATP binding/hydrolysis"J Biol Chem. 278. 8815-8819 (2003)
• [Publications] Ikeda, Y., Abe-Dohmae, S., Munehira, Y., Aoki, R., Kawamoto, S., Furuya, A., Shitara, K., Amachi, T., Kioka, N., Matsuo, M., Yokoyama, S., Ueda, K.: "Post-transcriptional regulation of human ABCA7 and its function for the apoA-I-dependent lipid release"Biochem Biophys Res Commun. 311. 313-318 (2003)
• [Publications] Fukada, T., Ono, M., Sakata, S., Kioka, N., Sakai, H., Komano, T.: "Genomic structure and 5'-flanking sequences of rat N-acetylglucosaminyltransferase I gene and regulatory role of its transcriptional diversity"Biosci Biotechnol Biochem. 67. 1515-1521 (2003)