2003 Fiscal Year Annual Research Report
クラスIIトランスアクチベーター遺伝子による神経内分泌癌への腫瘍免疫療法の確立
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14570154
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
矢澤 卓也 横浜市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50251054)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北村 均 横浜市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (20094302)
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| Keywords | クラスIIトランスアクチベーター / 主要組織適合抗原 / 癌 / 腫瘍免疫 |
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| Research Abstract |
1.前年度の検討により、HIV由来Tat蛋白をClass II transactivator(CIITA)遺伝子のN末端に融合することにより作製したTat-CIITAがin vitroにおいてヒト培養癌細胞内に移行しMHCを誘導することが明らかとなったため、マウス培養癌細胞においても同様の現象が起きるか検討した結果、マウス培養癌細胞においてもMHCを誘導しうることが明らかとなった。しかしTat-CIITA蛋白は大腸菌内で封入体を形成してしまうため、種々の方法を用いても大量に精製分取することが困難であり、動物実験系にこの組み換え蛋白を使用することができなかった。Plasmid vectorを用いてCIITAを安定的に強制発現させたマウス癌細胞は同系宿主に対して腫瘍免疫反応を惹起できることが判明したことから、この蛋白精製に関する問題に関しては今後も検討していく所存である。
2.次に、human CIITA(hCIITA)およびmouse CIITA(mCIITA)遺伝子下流にclass II主要組織合抗原(MHC)に呈示されるペプチド抗原のMHC結合モチーフに合致した結核菌(Tb)由来オリゴペプチドをコードするnulceotide sequenceをfurin切断モチーフを挟んで挿入した発現ベクターを作製した(pZeo-hCIITA-furin-Tb、pZeo-mCIITA-furin-Tb)。更にCIITA、TbにそれぞれHemaggulutinin tag(HA)、6x Histidine tag(His)を付加した発現ベクターを作製した(pZeo-hCIITA-HA-furin-Tb-His、pZeo-mCIIA-HA-furin-Tb-His)。これらの発現ベクターをヒト肺癌培養細胞TKB5に導入してその作動を確認した。
3.次に、これらの発現ベクターをA/Jマウス由来神経芽細胞腫(C1300)、C3H/HeNマウス由来乳癌株(MM102)、C57BL/6マウス由来肺癌株(Lewis)に導入し、安定発現株の作製を試みた。その結果、C1300-empty, C1300-hCIITA, MM102-empty, MM102-hCIITA, MM102-hCIITA-HA-furin-Tb-His, Lewis-empty, Lewis-hCIITA, Lewis-hCIITA-HA-furin-Tb-Hisが得られた。このうちMHC haplotypeにマッチした結核菌由来抗原ペプチドを発現しているLewis-hCIITA-HA-furin-Tb-Hisは、同系宿主であるC57BL/6マウスに対して強い腫瘍拒絶反応を惹起できることが明らかとなった。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Yazawa T: "Complicated mechanisms of class II transactivator transcription deficiency in small cell lung cancer and neuroblastoma"Am J Pathol. 161. 291-300 (2002)
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[Publications] Yazawa T: "Class II transactivator (CIITA) deficiency in tumor cells : Complicated mechanisms or not?"Am J Pathol. 163. 373-376 (2003)
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[Publications] Okudela K: "K-ras gene mutation enhances motility of immortalized airway cells and lung adenocarcinoma cells via AKT activation"Am J Pathol. 164. 91-100 (2004)
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[Publications] Ishii H: "Enhancement of pleural dissemination and lymph node metastasis of lung cancer cells by vascular endothelial growth factors (VEGFs)"Lung Cancer. (in press). (2004)
