突然変異導入に関与するREV蛋白の分子生物学的特性の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570185
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村雲 芳樹 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (40324438)
• Keywords: REV1 / REV3 / REV7 / 細胞内局在 / DNA損傷

Research Abstract

平成14年度はヒトREV蛋白の細胞内局在の解析を中心に研究を行った。REV蛋白はいずれも内因性の蛋白が微量のため、抗体を用いて内因性の蛋白を同定することが困難である。そのため,hREV1はGFP-hREV1またはFLAGタグをつけたhREV1を培養細胞に強制発現させ、またhREV7についてはhREV7の発現誘導細胞株を作成して、それぞれタグに対する抗体、またhREV1に対する抗体を用いて蛍光免疫染色を行った。細胞株は293細胞株を用いた。その結果、hREV7は細胞の核に局在し、約20%の細胞では数個から数十個の顆粒状のfociを形成していた。hREV7はほとんど全ての細胞で核にびまん性に局在し、顆粒状のfoci形成は示さなかった。紫外線照射や種々の薬剤によりDNA損傷を与えたときのhREV1、hREV7の局在の変化を検討したところhREV1はfoci形成の割合が増加したが、hREV7はfoci形成は示さず、変化は認められなかった。現在さらに詳細な検討を行っているところである。また、hREV7については種々のdeletion mutantを作成して、核への局在に重要なドメィンの場所を決定した。hREV3については、トランスフェクションによる一時的な強制発現では蛋白の発現が確認できなかったため、現在hREV3を高発現する細胞株の作成を試みているところである。今後は、hREV3の細胞内局在の検討と、hREV1、hREV3のdetetion mutantを用いたときのそれぞれの蛋白の局在の変化を検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Murakumo Y.: "The property of DNA polymerase zeta : REV7 is a putative protein involved in translesion DNA synthesis and cell cycle control"Mutat Res.. 510(1-2). 37-44 (2002)
• [Publications] Iwahashi N.: "Expression of Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor Correlates with Perineural Invasion of Bile Duct Carcinoma"Cancer. 94(1). 167-174 (2002)
• [Publications] Tezel.G: "Role for O-glycosylation of RFP in the interaction with enhancer of polycomb"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 290(1). 409-414 (2002)
• [Publications] Watanabe T.: "Characterization of gene expression induced by RET with MEN2A or MEN2B mutation"Am. J. Pathol.. 161(1). 249-256 (2002)
• [Publications] Nishikawa M.: "Cys611Ser Mutation in RET Proto-oncogene in Kindred with Medullary Thyroid Carcinoma and Hirschsprung's Disease"Eur. J. Hum. Genet.. (in press).