2003 Fiscal Year Annual Research Report

破骨細胞分化因子(RANKL)遺伝子発現調節機構の解析

Research Project

Project/Area Number	14570188
Research Institution	KOBE UNIVERSITY
Principal Investigator	北澤理子神戸大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00273780)
Keywords	破骨細胞 / RANKL / 遺伝子プロモータ / ビタミンD / cAMP応答配列 / メチル化シトシン
Research Abstract	骨芽細胞は、1)骨髄造血系細胞の増殖に必要なM-CSFなど液性因子の供給、2)破骨細胞への最終分化に不可欠な破骨細胞分化因子(RANKL)の発現を介して破骨細胞形成を支持する。私どもはマウスならびにヒトRANKL遺伝子5'上流プロモータ領域に関して、破骨細胞形成促進作用を示すVitamin D3や副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)の転写促進機構を検討した。マウスプロモータではVDRE(-940)の解析、ヒトプロモータについては3箇所の候補配列(-1584)、(-1418)、(-1383)のうち、機能的VDREとして最上流の(-1584)を解析した。さらに、悪性腫瘍骨転移巣におけるRANKL発現を検索するために、マウスおよびヒトRANKL遺伝子に対する高感度・特異的なプローブを作成してin situ hybridization法を行い、病理解剖症例の転移性骨腫瘍におけるPTHrP発現と溶骨性骨病変において骨芽細胞・骨髄間質細胞にRANKL mRNAを検出した。 PTHrPによるRANKL発現制御については、マウス及びヒトのRANKL遺伝子プロモータコンストラクトを用いたtransfection系に、PTHrP処理を行うとともにPKAのagonist,antagonist投与を行い転写活性に及ぼす効果を検討した。マウス及びヒトRANKL遺伝子プロモータにおけるcAMP応答配列(CRE)を検索した。マウス、ヒトいずれにも古典的なCREは存在しないが、各々数カ所の候補配列に着目してEMSA assayや変異導入実験を行い、機能的CREの存在を明らかにした。プロモータ活性の検討に加えて、H3,H4ヒストンに対する抗体を用いてのCHIP assayを行って、PTHrPもしくはPKA agonistの作用でクロマチン活性化が起こることを確認した。以上の成果は、英文誌に報告した(J Cell Biochem 2003)。また、成果の一部は第92回日本病理学会総会、第21回日本骨代謝学会、第62回日本癌学会総会、第25回米国骨代謝学会議にて報告した。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kitazawa S: "Vitamin D3 Supports Osteoclastogenesis via Functional Vitamin D Response Element of Human RANKL Gene Promoter"J Cell Biochem. 89・4. 771-777 (2003)
[Publications] Srivastava S: "Receptor Activator of NF-kB Ligand (RANKL) Induction via Jak2 and Stat5a in Mammary Epithelial Cells"J Biol Chem. 278・46. 46171-46178 (2003)
[Publications] Saijo M: "Heparanase mRNA Expression During Fracture Repair in Mouse"Histochem Cell Biol. 120・6. 493-503 (2003)
[Publications] Yano S: "Decrease in Vitamin D Receptor and Calcium-Sensing Receptor in Highly Proliferative Parathyroid Adenomas"Eur J Endocrinol. 148・4. 403-411 (2003)
[Publications] Darwanto A: "MeCP2 and Promoter Methylation Cooperatively Regulate E-Cadherin Gene Expression in Colorectal Carcinoma"Cancer Sci. 94・5. 442-447 (2003)
[Publications] Makino T: "Functional Giant Parathyroid Cyst with High Concentration of CA19-9 in Cystic Fluid"Endocr J. 50・2. 215-219 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

破骨細胞分化因子(RANKL)遺伝子発現調節機構の解析

Principal Investigator

北澤 理子 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00273780)

Research Products

[Publications] Kitazawa S: "Vitamin D3 Supports Osteoclastogenesis via Functional Vitamin D Response Element of Human RANKL Gene Promoter"J Cell Biochem. 89・4. 771-777 (2003)

[Publications] Srivastava S: "Receptor Activator of NF-kB Ligand (RANKL) Induction via Jak2 and Stat5a in Mammary Epithelial Cells"J Biol Chem. 278・46. 46171-46178 (2003)

[Publications] Saijo M: "Heparanase mRNA Expression During Fracture Repair in Mouse"Histochem Cell Biol. 120・6. 493-503 (2003)

[Publications] Yano S: "Decrease in Vitamin D Receptor and Calcium-Sensing Receptor in Highly Proliferative Parathyroid Adenomas"Eur J Endocrinol. 148・4. 403-411 (2003)

[Publications] Darwanto A: "MeCP2 and Promoter Methylation Cooperatively Regulate E-Cadherin Gene Expression in Colorectal Carcinoma"Cancer Sci. 94・5. 442-447 (2003)

[Publications] Makino T: "Functional Giant Parathyroid Cyst with High Concentration of CA19-9 in Cystic Fluid"Endocr J. 50・2. 215-219 (2003)

北澤理子神戸大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00273780)