赤痢アメーバの150-kDaレクチンを標的とした防御免疫の構築

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570223
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 橘 裕司 東海大学, 医学部, 助教授 (10147168)
• Keywords: 赤痢アメーバ / 接着 / レクチン / モノクローナル抗体 / 組換え蛋白質 / エピトープ

Research Abstract

赤痢アメーバの150-kDaレクチン(Igl1)について、全長[シグナル配列を除くamino acid(aa)14-1088]、N末端側(aa 14-382、N断片)、中央部(aa 294-753、M断片)、C末端側(aa 603-1088、C断片)に相当する組換え蛋白質を大腸菌で発現させた。これら4種類の組換え蛋白質と患者血清との反応性を、ELISAで調べた。抗原はマイクロプレート1穴当たり100ngを感作し、血清は、アメーバ性肝膿瘍患者由来(23検体)、アメーバ性大腸炎患者由来(34)、無症候性赤痢アメーバ嚢子排出者由来(15)、他種原虫感染者由来(40)、健康人由来(50)を用いた。健康人対照血清のOD平均値+3SDをcut-offとした結果、全長蛋白質を用いた際の感度は90%、特異性は94%であった。また、3つの断片を用いた場合の感度は、N断片で56%、M断片で92%、C断片では97%であった。一方、特異性は、N断片では96%、M断片とC断片では99%であった。全長蛋白質、M断片、C断片に対して、無症候性赤痢アメーバ嚢子排出者の血清は全例が陽性反応を示し、M断片とC断片に対して偽陰性を示したのは、アメーバ性大腸炎患者の血清だけであった。従って、M断片やC断片上のエピトープを認識する抗体が、アメーバ虫体の組織侵入阻止に関与している可能性が示唆された。また、組換えC断片は、血清診断用の抗原としても有用であると考えられた。大腸菌で調製したIgl1の全長組換え蛋白質でハムスターを免疫した後、肝臓に栄養型虫体を接種し、肝膿瘍形成の抑制効果について検討した。しかしながら、有意な効果は認められなかった。NativeなIglによる免疫は有効であることから、ワクチン効果を発揮するには糖鎖上のエピトープも重要であると考えられた。

Research Products

• [Publications] Tachibana, H., et al.: "VH3 gene usage in neutralizing human antibodies specific for the histolytica Gal/GalNAc lectin heavy subunit"Infect.Immun.. 71(8). 4313-4319 (2003)
• [Publications] Tachibana, H., et al.: "Bacterial expression of a human monoclonal antibody-alkaline phosphatase conjugate specific for Entamoeba histolytica"Clin.Diagn.Lab.Immunol.. 11(1). 216-218 (2004)
• [Publications] Tachibana, H., et al.: "Evaluation of recombinant fragments of Entamoeba histolytica Gal/GalNAc lectin intermediate subunit for serodiagnosis of amebiasis"J.Clin.Microbiol.. 42(3)(印刷中). (2004)
• [Publications] 橘 裕司: "輸入感染症"内科. 91(6). 1246 (2003)