インフルエンザ菌による肺適応免疫誘導に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570556
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 大石 和徳 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助教授 (80160414)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 麻生 憲史 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助手 (70325653)
• Keywords: インフルエンザ菌 / 外膜蛋白質 / P6蛋白質 / 樹状細胞 / 適応免疫誘導 / SLC / CCL21 / ELC / CCL19 / CCR7

Research Abstract

インフルエンザ菌(non-typable H.influenzae:NTHi)の外膜蛋白質(OMP)をBALB/cマウスに経気道反復接種し(Day 0,Day 7,Day 14)、その後の肺所属リンパ節へのCD11c+/CD86+陽性の成熟樹状細胞(DC)の集積をフローサイトメトリー法で検討した。DC集積は初回OMP接種後24時間後にピークとなり、その後7日後まで漸減した。2回目のOMP接種後は肺所属リンパ節への明らかなDC集積は認められなかった。
P6蛋白質はインフルエンザ菌表層の共通抗原で、ワクチン抗原の候補とされている。OMP接種後の肺所属リンパ節細胞を用いて、in vitroのP6特異的な増殖も確認され、所属リンパ節内でのP6特異的なDC-T細胞応答が示唆された。一方、P6特異的な抗体産生誘導について、初回接種4日後には血中にOMP特異的なIgG, IgM産生誘導が認められ、気管支肺胞洗浄液(BALF)中には接種14日からP6特異的IgA抗体産生誘導が確認された。さらに、接種後4日には脾臓細胞においてELISPOT法によるP6特異的IgG, IgM産生細胞が検出され、肺所属リンパ節においても接種後21日にはP6特異的IgA産生細胞が確認された。OMP接種後のマウス肺の組織学的検討では、接種21日後に気管支粘膜下にIgA抗体産生を示す形質細胞の増生が認められた。NTHi OMPの経気道的侵入に伴う、肺へのDC集積と肺・全身における適応免疫誘導がリンクすることが示された。
DCの遊走活性はsecondary lymphoid tissue chemokine(SLC:CCL21)、ELC/CCL19とCCR7により制御されることが知られている。そこで、OMPをマウス経気道反復接種後の肺所属リンパ節におけるSLC,ELC,CCR7の遺伝子発現を検討した。SLC,ELCの発現は初回、反復接種によっても遺伝子発現に変化が認められ無かったのに対し、CCR7の発現は初回接種後7日目に著明に抑制され、14日、21目後には発現の回復が認められた。このことから、反復接種におけるDCの所属リンパ節への遊走抑制にはCCR7の発現制御が関与することが示唆された。さらに、SLCについてはSLCペプチドを合成し、家兎に免疫し、抗マウスSLC抗血清を作成した。この抗SLC抗血清を前投与後に、NTHi OMPをマウスに経気道反復接種すると、肺所属リンパ節へのDC集積が有意に抑制されることが確認された。今後、SLCのP6特異的抗体誘導誘導に対する役割の検討が必要である。

Research Products

• [Publications] Amano H, Oishi K, et al.: "Essential contribution of monocyte chemoattractant protein-1/C-C chemokine ligand-2 to resolution and repair processes in acute bacterial pneumonia"J.Immunol.. 172. 398-409 (2004)
• [Publications] Watanabe H, Oishi K, et al.: "Possible high rate of transmission of nontypeable Haemophilus influenzae including β-lactamase-negative ampicillin-resistant strains between children and their parents"J Clin Microbiol. 42. 362-365 (2004)
• [Publications] Asoh N, Watanabe H, Oishi K, et al.: "Emergence of rifampin-resistant Rhodococcus equi with several types of mutations in therpoB gene among AIDS patients in northern Thailand"J Clin Microbiol. 41. 2337-2340 (2003)
• [Publications] Oishi K, et al.: "Correlation between increased platelet-associated IgG and thrombocytopenia in secondary dengue virus infections"J Med Virol. 71. 259-264 (2003)
• [Publications] Watanabe H, K, Oishi K, et al.: "Antimicrobial susceptibility and serotype distribution of Streptococcus pneumoniae and molecular characterization of multidrug-resistant serotype 19F, 6B, and 23F Pneumococci in northern Thailand"J Clin Microbiol. 41. 4178-4183 (2003)
• [Publications] Takahashi H, Oishi K, et al.: "Decreased serum opsonic activity against Streptococcus pneumoniae in human immunodeficiency"Clin Infect Dis.. 37. 1534-1540 (2003)
• [Publications] 大石和徳他: "分子予防環境医学"本の泉社. 768 (2003)