2002 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
14571550
|
|---|
| Research Institution | 山梨医科大学 |
|---|
Principal Investigator |
星 和彦 山梨大学, 医学部, 教授 (20111289)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
笠井 剛 山梨大学, 医学部, 講師 (20194699)
平田 修司 山梨大学, 医学部, 助教授 (00228785)
|
|---|
| Keywords | sperm factor / PLCζ / 精巣cDNA / ヒト |
|---|
| Research Abstract |
本研究の目的は、受精の際「卵細胞の活性化」の引き金である細胞内Caイオンの律動的な変化(Ca oscillation)を惹起するヒト精子細胞質内の「卵細胞活性化因子(sperm factor)」を同定しようとするものであった。研究の開始段階においては、ヒト精子のsperm factorの構造についての手がかりはまったくなかったため、本年度前半は、発現スクリーニング法を用いたcDNAクローニングを試み、その実験系の確立を行った。しかしながら、研究遂行中に英国のグループより、マウスのsperm factorの本態が精子特異的なphosphlipase C(PLCζ)であることが報告された(Development 129:3533,2002)。本研究は、ヒト精子のsperm factorを同定し、さらに、真核細胞発現系を用いて組み換えタンパクを発現させ、組み換えタンパクの生理活性を解析することである。したがって、この報告ののち、本年度後半ではヒトPLCζのcDNAクローニングを行うこととした。この目的で、マウスのPLCζ cDNAの塩基配列より予想されるヒトPLCζ cDNAの塩基配列に基づいて、PCRプライマーを作成し、ヒト精巣のRNAよりヒトPLCζ cDNAの一部を遺伝子増幅した。さらにその増幅遺伝子を用いて、本年度前半に確立した方法により、ヒト精巣のcDNAライブラリーをスクリーニングし、陽性クローンを得た。現在、この陽性クローンの塩基配列を解析し、また、それを用いて発現ベクターを構築しつつある。
|
Research Products
(3 results)
-
[Publications] Hirata S, Shoda T, Kato J, Hoshi K: "The novel isoform of the estrogen receptor-alpha cDNA(ER alpha isoform S cDNA)in the human testis"J Steroid Biochem Mol Biol. 80(3). 299-305 (2002)
-
[Publications] Shoda T, Hirata S, Kato J, Hoshi K: "Cloning of the novel isoform of the estrogen receptor cDNA(ERβ isoform M cDNA)from the human testicular cDNA library"J Steroid Biochem Mol Biol. 81(2-3). 201-206 (2002)
-
[Publications] Hirata S, Shoda T, Kato J, Hoshi K: "Novel isoforms of the mRNA for human female sex steroid hormone receptors"J Steroid Biochem Mol Biol. 83(1-5). 25-30 (2002)
