ヒト染色体導入マウスによる腫瘍関連抗原に対するヒトモノクローナル抗体の作製と応用

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14572195
• Research Institution: Fukuoka University
• Principal Investigator: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 芝口 浩智 福岡大学, 医学部, 助手 (60295061) ; 黒木 求 福岡大学, 医学部, 講師 (10131822)
• Keywords: 腫瘍関連抗原 / 癌胎児性抗原 / CEA / モノクローナル抗体 / ヒトモノクローナル抗体 / 免疫療法 / ADCC / CDC

Research Abstract

異種動物由来のモノクローナル抗体をヒトに投与する場合の抗原性を解決するため、ヒト抗体遺伝子を導入したKM Mouse^<TM>を用い、癌胎児性抗原(CEA)に対する完全なヒトモノクローナル抗体(HmAb)を作製し、昨年度はその免疫化学的性状およびインビトロにおける抗体依存性細胞傷害活性(ADCC)を中心とする抗腫瘍活性を報告した。本年度は、抗CEA HuMAbのCEA発現癌細胞に対するin vitroでの補体依存性細胞障害活性(CDC)活性を検討し、さらにマウス移植ヒト癌細胞に対する抗腫瘍効果を検討した。
CEA発現および非発現胃癌細胞株に、サブクラスの異なる抗CEA HuMAbと,補体として新鮮ヒト血清を加えインキュベートし、MTS assayにより細胞の生存率を調べた。in vivoでの抗腫瘍効果は,CEA発現胃癌細胞株を皮下に移植したSCIDマウスに、抗CEA HuMAbを静注し、経時的に腫瘍の大きさを測定した。その結果、CDC assayでは,IgG1およびIgG3のHuMAbはCEA発現細胞株にのみ約55〜65%の高い傷害活性を示した。IgG4のHuMAbにはCDC活性はほとんど見られなかった。一方担癌マウスでは、IgG1のHuMAbを投与した群では対照群に比べ有意な腫瘍増殖抑制効果が見られた。
以上の結果より、抗CEA HuMAbはin vitroでもin vivoでもCEA産生癌の増殖を抑制した。KMマウスを用いて作製した抗CEAヒト抗体は副作用の少ない抗体としてCEA発現癌細胞の治療に有用と思われる。

Research Products

• [Publications] Imakiire, T., Kuroki, Mo., Shibaguchi, H., et al.: "Generation, immunologic characterization and antitumor effects of human monoclonal antibodies for carcinoembryonic antigen"International Journal of Cancer. 108・4. 564-570 (2004)
• [Publications] Gyobu, H., Tsuji, T., Suzuki, Y., Ohkuri, T., Chamoto, K., et al.: "Generation and targeting of human tumor-specific Tcl cells transduced with a lentivirus containing a chimeric immunoglobulin T cell receptor"Cancer Research. 64・4. 1490-1495 (2004)
• [Publications] Kuroki, Ma., Shibaguchi, H., Imakiire, T., Uno, K., et al.: "Immunotherapy and gene therapy of cancer using antibodies or their genes against tumor associated antigens"Anticancer Research. 23・6. 4377-4382 (2003)
• [Publications] Shibaguchi, H., Arakawa, F., Imakiire, T., Kuroki, Mo., et al.: "cDNA cloning and sequencing of a navel monoclonal antibody to carcinoembryonic antigen antigen and construction of a mouse/human chimeric antibody"Anticancer Research. 23・6. 4383-4388 (2003)
• [Publications] Li, T., Tachibana, K., Kuroki, Mo., Kuroki, Ma: "Gene transfer with echo-enhanced contrast agents : comparison between Albunex, Optison, and Levovist in mice -- initial results"Radiology. 229・2. 423-428 (2003)
• [Publications] Fukushima, K., Ikehara, Y., Kanai, M., Kochibe, N., et al.: "A β-N-acetylglucosaminyl phosphate diester residue is attached to the glycosylphosphatidyl-inositol anchor of human placental alkaline phosphatase. A target of the channel-forming toxin aerolysin"Journal of Biological Chemistry. 278・38. 36296-36303 (2003)
• [Publications] Kuroki, Ma.: "Methods in Molecular Biology, Vol.279, Nitric Oxide Protocols (A.Hassid, ed.)"Humana Press, Totowa, NJ, USA. 201-211 (2004)