2003 Fiscal Year Annual Research Report
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14580699
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
都留 秋雄 奈良先端科学技術大学院大学, 遺伝子教育研究センター, 助手 (80273861)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河野 憲二 奈良先端科技術大学, 遺伝子教育研究センター, 教授 (50142005)
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| Keywords | 小胞体 / ストレス応答 / IRE1 / BiP / センシング |
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| Research Abstract |
真核生物にはIRE1と呼ばれる小胞体ストレスセンサータンパク質が存在する。酵母においてはIRE1は1種類、哺乳類においてはIRE1α、IRE1βの2種類が同定されている。酵母IRE1、哺乳類IRE1αおよびβは、N末端を小胞体内腔側、C末端を細胞質側に露出させているI型膜貫通蛋白質である。これらの分子の小胞体内腔側領域には、非ストレス時においては小胞体シャペロンであるGRP78/BiPが結合しているが、細胞に小胞体ストレスを与えるとGRP78/BiPが離れるという現象が見出されている。また、IRE1は二量体化することによって活性化することも知られている。これまでに我々は、シーケンシャルに欠失変異体を作成することによって、IRE1の小胞体内腔領域には活性化に関与する2つのサブドメイン、及びGRP78/BiPとの結合に関与するサブドメインが存在することを示唆するデータを得ていた。そこで今年度はIRE1の小胞体内腔領域の各サブドメインを大腸菌および酵母で発現させ、精製した各サブドメインの機能をin vitroで検証した。非変成条件下での電気泳動、及び異なるタグを付けたサブドメインの共沈降実験によって、活性化に関与することが示唆されていた2つのサブドメインのうち、主に膜貫通領域側サブドメインがホモ二量体化に関与することが明らかとなった。また、GRP78/BiPとの共沈降実験から、小胞体膜貫通領域の直前にGRP78/BiPの結合領域があることが確認された。
これらの知見は、IRE1の小胞体ストレス感知機構を解明するにあたり、重要な手がかりになると考えられる。
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