2003 Fiscal Year Annual Research Report
特異的膜輸送に関与するSecl/Munc-18ファミリーの構造機能相関
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14580748
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University School of Medicine |
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Principal Investigator |
安藤 恵子 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (40221741)
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| Keywords | Caenorhabditis elegans / vps45 / リソソーム / secl / SNARE |
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| Research Abstract |
Secl/Munc-18ファミリーメンバーであるvps45線虫オルソログに着目し、特異的膜輸送と機能的ドメインの相関を解析するため本年度以下の実験を行った。
1.syntaxinとの相互作用の解析
酵母vps45はsyntaxinメンバーであるTlg2と相互作用し、細胞質からvacuoleへのメンブレントラフィックに関わることが報告されている。Tlg2との相互作用に関わる線虫vps45のドメインを明らかにするためyeast two hybridシステムによりdeletion studyおよびchimera studyを行った。Sec1/Munc-18ファミリーは3つのドメインから構成されているためN末およびC末から各ドメインを欠失させたconstructおよびunc-18とのキメラ体を各種作成し解析した。その結果ドメイン1単独あるいは全長タンパク質のみTlg2との相互作用能があることがわかった。この相互作用能はドメイン1内のD28N変異により消失した。
2.線虫vps45変異体の表現型解析
GFPを用いたレポーター解析では、vps45は神経、筋、下皮、腸管など多くの組織で発現がみられた。また、GFPをタグにすることで可視化したカテプシンD蛋白質の動態(ゴルジ体からリソソームヘの輪送)や卵黄蛋白質であるビテロジニニンの卵細胞への取り込み(レセプター仲介エンドサィトーシス)、偽体腔内に強制発現させたGFPのマクロファージ様細胞への取り込み(液相エンドサイトーシス)を変異体バックグラウンドで観察した。その結果線虫vps45は酵母vps45から予測されるゴルジ体からリソソームヘの輸送だけではなくエンドサイトーシスにも必須の機能をもつことを発見した。
3.線虫vps45とTlg2との相互作用がどの輸送経路に関わっているのかを解明するため変異体のどの表現型がD28N変異によりレスキューされるのかを解析した。変異体の致死性に対するレスキュー活性は認められなかった。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kimura Y et al.: "A CaMK cascade activates GRE-mediated transcription in neurons of Cae-norhabditis elegans."EMBO Report. 3(10). 962-966 (2002)
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[Publications] Ishihara T et al.: "HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory inte-gration and learning in Caenorhabditis elegans"Cell. 109(5). 639-649 (2002)
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[Publications] Iwahashi J et al.: "Caenorhabditis elegans reticulon interacts with RME-1 during embryogenesis."Biochern Biophys Res Commun.. 293(2). 698-704 (2002)
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[Publications] Ogura K et al.: "Translational control of maternal glp mRNA by POS- 1 and its interacting protein SPN-4 in Caenorhabditis elegans."Development. 130(11). 2495-2503 (2003)
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[Publications] Mizuguchi S et al.: "Chondroitin proteoglycans are involved in cell division of Caenorhabditis eleoans."Nature. 423(6938). 443-448 (2003)
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[Publications] Wang X et al.: "Cell corpse engulfment mediated by C.elegans phosphatidylserine receptor through CED-and CED-12"Science. 302(5650). 1563-1566 (2003)
