2003 Fiscal Year Annual Research Report

脂肪細胞を利用したインスリン分泌機構の再構成

Research Project

Project/Area Number	14657043
Research Institution	Kyorin University
Principal Investigator	永松信哉杏林大学, 医学部, 教授 (80231489)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	石田均杏林大学, 医学部, 教授 (80212893) 片平宏杏林大学, 医学部, 助手 (20327472) 今泉美佳杏林大学, 医学部, 助手 (40201941)
Keywords	脂肪細胞 / 再生医療 / インスリン / GLUT4 / アデノウイルス
Research Abstract	脂肪細胞は、単にエネルギーを脂質として貯蔵するだけの器官ではなく、アディポネクチン、又はTNFなどのサイトカインを分泌する分泌細胞でもある。私達は、この脂肪細胞が有する内分泌細胞としての機能に注目し、脂肪細胞をβ細胞の代用として利用し、インスリン依存性にインスリン分泌を起こさせることによって、糖尿病において減弱している末梢でのインスリン抵抗性を改善することを試みた。前年度までの実験において、ヒトインスリンにgreen fluorescent protein(GFP)を融合したアデノウィルスを作製し、3T3L1脂肪細胞に導入すると、インスリンGFPがGLUT4小胞にsortingされ、外部のインスリン依存性に細胞膜へ輸送されることが確認され、更に、これによってインスリン作用が増殖されることも明らかとなった。しかしながら、この系を、実用化するためには、GLUT4小胞輸送の基本機構を解明することが必須である。そのために、GLUT4小胞の細胞内traffickingを明らかにする目的で、GLUT4小胞1個の観察が可能なエヴァネッセントレーザー蛍光顕微鏡システムを構築し、GLUT4の細胞膜におけるclusteringに関するインスリンによる変化を検討した。GLUT4小胞を標識するために、ヒトGLUT4cDNAのN末端にGFPを融合した発現ベクターを構築し、これを3T3L1脂肪細胞に発現させたところ、GLUT4小胞へsortingされることが確認された。GLUT4小胞を標識するために、ヒトGLUT4cDNAのGFPを融合した発現ベクターを構築し、これを3T3L1脂肪細胞に発現させたところ、GLUT4小胞へsortingされることが確認された。GLUT4小胞は、インスリン刺激により細胞膜を融合し、clusteringを形成する様である。一方、脂肪細胞内でも、プロインスリンに変換できるfusion-insulinのvectorの構築には成功したが、アデノウイルスへの変換は困難であり、現在これを克服しているところである。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 永松信哉: "ホルモン分泌の生化学的機構"内分泌・糖尿病科. 17. 519-525 (2003)
[Publications] 永松信哉: "2相性インスリン分泌機構"Diabetes Frontier. 15. 39-45 (2004)
[Publications] Katsuta H, Nagamatsu S et al.: "Insulinotropic action of glutamate is dependent on the inhibition of ATP-sensitive potassium channel activities in MIN 6 beta cells."Biochem Biophys Res Commun. 311. 660-664 (2003)
[Publications] Nakamichi Y, Nagamatsu S et al.: "PPAR-gamma overexpression suppresses glucose-induced proinsulin biosynthesis and insulin release synergistically with pioglitazone in MIN6 cells."Biochem Biophys Res Commun. 306. 832-836 (2003)
[Publications] Ohara-Imaizumi M, Nagamatsu S et al.: "Site of docking and fusion of insulin secretory granules in live MIN6 β cells analyzed by TAT-conjugated anti-syntaxin 1 antibody and total internal reflection fluorescence microscopy."J Biol Chem. 279. 8403-8408 (2004)
[Publications] Nagamatsu S et al.: "Recent research development in biophysics & biochemistry"SNARE-mediated insulin exocytosis.. 457-470 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

脂肪細胞を利用したインスリン分泌機構の再構成

Principal Investigator

永松 信哉 杏林大学, 医学部, 教授 (80231489)

Research Products

[Publications] 永松信哉: "ホルモン分泌の生化学的機構"内分泌・糖尿病科. 17. 519-525 (2003)

[Publications] 永松信哉: "2相性インスリン分泌機構"Diabetes Frontier. 15. 39-45 (2004)

[Publications] Katsuta H, Nagamatsu S et al.: "Insulinotropic action of glutamate is dependent on the inhibition of ATP-sensitive potassium channel activities in MIN 6 beta cells."Biochem Biophys Res Commun. 311. 660-664 (2003)

[Publications] Nakamichi Y, Nagamatsu S et al.: "PPAR-gamma overexpression suppresses glucose-induced proinsulin biosynthesis and insulin release synergistically with pioglitazone in MIN6 cells."Biochem Biophys Res Commun. 306. 832-836 (2003)

[Publications] Ohara-Imaizumi M, Nagamatsu S et al.: "Site of docking and fusion of insulin secretory granules in live MIN6 β cells analyzed by TAT-conjugated anti-syntaxin 1 antibody and total internal reflection fluorescence microscopy."J Biol Chem. 279. 8403-8408 (2004)

[Publications] Nagamatsu S et al.: "Recent research development in biophysics & biochemistry"SNARE-mediated insulin exocytosis.. 457-470 (2003)

永松信哉杏林大学, 医学部, 教授 (80231489)