2002 Fiscal Year Annual Research Report
サブトラクション法を用いたマウス羊膜における分娩発来に関係する未知因子の探索
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14657188
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
稲田 浩 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 助手 (00244640)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡野 善行 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (60231213)
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| Keywords | 分娩発来 / メカニズム / サブトラクション法 / ディファレンシャル□ディスプレー法 / 羊膜 / 未知因子 |
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| Research Abstract |
分娩発来のメカニズムに関しては、プロスタグランジンやオキシトシンの関わる系については、子宮や卵巣を中心に多くの知見が得られつつあるが、その詳細はまだ明らかではない。そして羊膜における、妊娠後期から分娩前のダイナミックに変化する生理活性物質やレセプターなどの各種因子の探索、これらの量的・質的変化とその機能、生理的変化についての検討はほとんどされていない。
マウスの分娩発来には、プロスタグランジン(PG)が卵巣の黄体融解を起こし、同部位でのプロゲステロン産生が低下する。この低下が子宮筋層でのオキシトシンレセプターの発現を誘導し分娩に至ることが、シクロオキシゲナーゼのアイソフォームI型(COX-1)ノックアウト(KO)マウスなどを用いた研究により明らかにされている。このCOX-1 KOマウス(♂)と野生型(WT)マウス(♀)の交配、WTマウス(♂)とCOX-1 KOマウス(♀)の交配を行った。羊膜は胎児由来の組織であるため、両群ともヘテロの遺伝型を持つ。マウスの分娩時期は母獣の遺伝型に規定されるためWTマウス母獣は予定日に出産し、COX-1 KOマウス母獣の出産は予定日より3日以上遅れる。この実験系では母獣のプロスタグランジンレベルやプロゲステロン値など各種生理活性物質の違いが、同一のヘテロの遺伝型を持つ胎児に影響を及ぼす。在胎19.0日(野生型マウスの出産予定日の前日夕刻)に両群の胎児羊膜を採取し、グアニジンチオシアネート・塩化セシウム法を用いてmRNAプールを作製した。今後両群のmRNAプールよりClontech PCR-Select^<TM> cDNA ＆ Subtraction Kitを用いてcDNA断片プールを得、次にPCR-Select Differential Screening Kitを用いて、一群にのみ特異的に発現しているcDNAを探索する。
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