新規非膜系オルガネラcentriolar satellitesの構造・機能解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770047
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 久保 亮治 京都大学, 医学研究科, 助手 (70335256)
• Keywords: PCM-1 / 中心体 / 微小管 / Centriolar satellites / 細胞生物学

Research Abstract

1.PCM-1のドミナントネガティブ変異体によるcentriolar satellitesの機能・構造解析
PCM-1蛋白はcentriolar satellitesのscaffold proteinであることをこれまでの研究で示してきた。今回PCM-1蛋白同士の結合を担う部位を同定した。このPCM-1同士の結合を担う部分のペプチドを細胞に高発現させるとcentriolar satellitesを分解する事ができた。このペプチドによりendogenousなPCM-1同士の結合が阻害される事でcentriolar satellitesが分解すると考えられる。Centriolar satellitesが分解された細胞はPCM-1をRNAiによりknock-downした細胞とほぼ同じphenotype(中心体のpericentrin量の減少、細胞周期停止)を示した。これらの結果から、PCM-1蛋白がcentriolar satellitesという構造を取ることが、その機能発現に必須であることが示された。
2.ツーハイブリ法によるPCM-1結合蛋白の探索
PCM-1蛋白の各ドメインをbaitとしてツーハイブリ法を行い、PCM-1結合蛋白を探索した。いくつかのcandidateについて、タグをつけて細胞に発現させ、その局在を検討した。また、可能性のあるものについて抗体を作成し、細胞内局在およびPCM-1との結合を検討中である。

Research Products

• [Publications] Akiharu Kubo, H.Sasaki, A.Yuba-Kubo, S.Tsukita, N.Shiina: "Centriolar satellites : molecular characterization, ATP-dependent movement toward centrioles and possible involvement in ciliogenesis"Journal of Cell Biology. 147巻、5号. 969-980 (1999)
• [Publications] Akiharu Kubo, Shoichiro Tsukita: "Non-membranous granular organelle consisting of PCM-1 : subcellular distribution and cell-cycle-dependent assembly/disassembly"Journal of Cell Science. 116巻、5号. 919-928 (2003)
• [Publications] Matsuda M, Kubo A, Furuse M, Tsukita S.: "A peculiar internalization of claudins, tight junction-specific adhesion molecules, during the intercellular movement of epithelial cells."Journal of Cell Science. 117巻、7号. 1247-1257 (2004)