2003 Fiscal Year Annual Research Report
KRAZ及びKAP-1のヘテロクロマチン領域における転写抑制メカニズムの解析
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14770052
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
松田 永照 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (00335481)
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| Keywords | KRAB domain / KAP-1 / co-repressor / HP1 / セントロメリックヘテロクロマチン / TSA / gene-trap / BTB domain |
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| Research Abstract |
1.KRABドメインを持つKruppleタイプのZnフィンガー因子は、KAP-1というco-repressorを介して転写を拗制することが知られている。申請者が単離した二つのKRABドメインを持つKRAZ1とKRAZ2による転写抑制コンプレックスが、KAP-1とHP1を介してセントロメリックヘテロクロマチンに局在することと、この局在能力と転写活性が相関すること、また、この構造を保つためにはTSA感受性の脱アセチル化酵素の活性が必要であることを明らかにした。TSAによるKRAZ・KAP-1の複合体がセントロメリックヘテロクロマチンに局在するHP1との分離を免疫沈降法の実験より明らかにした。
2.KRAZ・KAP-1のヘテロクロマチン複合体形成におけるヒストン修飾の役割を検証するため、KRAZとKAP-1の欠失変異体と、tetによるon/off可能なstable lineを用いた。Reporter assay及びChip assayの結果より、KRAZ・KAP-1の転写抑制が9番目リジンメチル化ヒストン3(H3-MeK9)が関与することを確認した。又、TSAと5-azacytidineを用いた実験では、KRAZ・KAP-1によるgene silencing状態の維持にはDNAのメチル化が重要であることが示唆された。
3.ヘテロクロマチン領域に局在するBTBドメインを有する転写因子が報告された。申請者はgene-trapを行い、単離同定した新規BTBタンパク質GetBは細胞核に特徴的なドット状がセントロメリックヘテロクロマチン領域に局在することを確認した。GetBの転写抑制には、co-repressorであるCtBPとの結合がヘテロクロマチン領域に共局在することが重要であることを明らかにした。
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Research Products
(1 results)
