結核菌の新規蛋白質MDP1による,菌の増殖抑制及び休眠状態誘導の機構解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770121
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 松本 壮吉 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (30244073)
• Keywords: 結核 / 抗酸菌 / 新興再興感染症 / 蛋白質 / ムコ多糖

Research Abstract

MDP1欠失Mycobacterium tuberculosisおよびMycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin(BCG)株作製のためのplasmid vectorの構築を行った。まず、MDP1遺伝子上流および下流領域の遺伝子断片をクローニングした。断片中のMDP1遺伝子を遺伝子増幅法を用いて欠失させ、代わりにハイグロマイシン耐性遺伝子を挿入した。この操作を大腸菌用のplasmid vector、pUC19上にて行い、最終的にpPR27に挿入した。このplasmidをpPRMDP-Hygと名付けた。このplasmidでBCGの形質転換を行った。32℃にて培養し、形質転換体を得た。これを5%シュークロース含有および不含培地にて培養し、シュークロース感受性株を得た。それをハイグロマイシン、5%シュークロース含有7H11OADC培地上にて39℃で培養し、熱耐性およびシュークロース耐性の表現型(これが、理論上のノックアウト株の表現型である)株を得た。現在、MDP1遺伝子欠失株が得られたか、分子生物学的手法を用いて解析している。
一方、MDP1が宿主細胞にムコ多糖類を介して接着し、菌の細胞侵入に関わる分子である可能性を見い出した。MDP1は、ヘパリン、コンドロイチン硫酸に結合した。その結合定数を同定した結果それぞれ2.3x10_<-8>,1.6x10^<-8>であった。MDP1は,培養した肺胞上皮細胞に接着し、それはムコ多糖を分解する事で阻害できた。今後、MDP1が実際の菌の接着および侵入に関与するかを明らかにする予定である。

Research Products

• [Publications] Sakai T, Hisaeda H, Matsumoto S, et al.: "Gene gun-based co-immunization of merozoite surface protein-1 cDNA with IL-12 expression plasmid confers protection against lethal Plasmodium yoelii in A/J mice"Vaccine. 21・13-14. 1432-1444 (2003)
• [Publications] Yamada H, Kuroda E, Matsumoto S, et al.: "Prostaglandin E2 down-regulates viable Bacille Calmette-Guerin-induced macrophage cytotoxicity against murine bladder cancer cell MBT-2 in vitro"Clin Exp Immunol.. 128・1. 52-58 (2002)
• [Publications] Kawahara M, Matsuo K, Nakasone T, Matsumoto S: "Combined intrarectal/intradermal inoculation of recombinant Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin (BCG) induces enhanced immune responses against the inserted HIV-1 V3 antigen"Vaccine. 21・3-4. 158-166 (2002)
• [Publications] 松本壮吉(分担執筆): "病原微生物学"東京化学同人. 10 (2002)