MuLVアクセサリー蛋白発現のメカニズムとウイルス播種の制御の解明

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770133
• Research Institution: Dokkyo Medical University
• Principal Investigator: 藤沢 隆一 獨協医科大学, 医学部, 助手 (70319664)
• Keywords: MuLV / アクセサリー蛋白 / レトロウイルス

Research Abstract

MuLVの糖鎖修飾Gag蛋白の発現は、in vivoでのウイルスの増殖および播種に重要であるが、その詳細なメカニズムは不明である。糖鎖修飾Gag蛋白の発現が個々の細胞によるウイルス産生を促進させる可能性を探るため、神経病原性MuLV(KP)、その弱毒化した変異体ウイルス(Kp41)、および糖鎖修飾Gag蛋白の発現を阻止した変異体ウイルスをマウス由来の様々な培養細胞株に感染させ、ウイルス産生量を経時的に測定した。これまで入手可能な種々のマウス由来細胞株を試してきたが、この蛋白の発現がウイルスの産生量に影響を及ぼす細胞株は確認されなかった。これまで試してきた細胞株はいずれも線維芽細胞などの非極性細胞であり、in vivoでのウイルス播種の出入門戸となり得る上皮・内皮系の細胞は無かった。そこで昨年度に樹立した同種指向性マウスレトロウイルス受容体mCAT1をGFP標識した融合蛋白を導入したイヌ腎由来上皮細胞株MDCK並びにヒトHeLa細胞を用いて各種ウイルスを感染させ、経時変化およびウイルスの出芽方向の差異(基底側・先端側)について現在検討を進めている。また、これら感染細胞において、細胞膜上での糖鎖修飾Gag蛋白の局在を蛍光抗体法にて調べたところ、KPでは先端側に、KP41では基底側〜全周性に局在することが分かった。さらに細胞内輸送経路の詳細を共焦点レーザー顕微鏡を用いて蛍光抗体法にて解析した。現在、この結果を免疫沈降法にて追試中である。
以上の結果の一部は、日本ウイルス学会The 2003 International Workshop on Retroviral Pathogenesisなどの学術集会でも報告した。