ヒト19番染色体長腕領域における新規インプリント遺伝子の網羅的検索と構造解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770292
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 前川 真治 鳥取大学, 遺伝子実験施設, 助手 (70314606)
• Keywords: ゲノム刷り込み現象 / DNAメチル化 / グリオーマ / がん抑制遺伝子

Research Abstract

親起源の明らかなヒト染色体を1本保持するマウスA9雑種細胞株を用い、ヒト19番染色体上のDifferential methylated region候補領域のメチル化状態を検索した。各雑種細胞株より抽出したゲノムDNAをメチル化感受性制限酵素で消化した後、アレル間のメチル化状態をPCRにて解析を行い、19q13.4の約380kb領域内に母方染色体特異的にメチル化状態にあるCpGアイランドを6ケ所同定した。それらのCpGアイランド近傍に位置する転写物についてアレル特異的な発現様式をRT-PCRで検索し、6つの父性発現様式を示すESTを得た。それらの内1つの転写物について正常ヒトリンパ芽球様細胞を用い、父性発現のインプリント遺伝子であることを確認した。また、隣接する新規遺伝子は母方特異的発現様式を呈した。さらにRACEとRT-PCRを行い、両遺伝子の全長を明らかにした。父性発現遺伝子はC2H2型ジンクフィンガーモチーフを有するタンパク質をコードする遺伝子であり、ヒト正常脳組識における刷り込み状態には個体差が認められた。本領域はヒト19番染色体上の新たなインプリンティングドメインである。また、19qにはこれまでにグリオーマ腫瘍抑制能を有する片親性発現遺伝子の存在が示唆されている。続いて同定した新規インプリント遺伝子の脳腫瘍形成に果たす役割を検討した。グリオーマ細胞株を用い、インプリント遺伝子の発現と発現制御部位であると考えられる近位のCpGアイランドのメチル化状態との相関をRT-PCR法、およびBisulfite sequencing法により解析したところメチル化による刷り込みの異常を確認した。