未熟な造血細胞に発現する新規の5回膜貫通型分子M83の機能の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770528
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 本橋 力 岐阜大学, 大学院・医学研究科, 助手 (40334932)
• Keywords: 5回膜貫通型分子M83 / 造血細胞 / 遺伝子ノックアウトマウス / M83ゲノム構造 / モノクローナル抗体

Research Abstract

本研究は未熟なヒト血液細胞であるF36P細胞から新規に同定した細胞膜上発現分子であるM83分子の機能を解析するものである。M83分子は既知の分子と類似性が全くない新しい膜貫通型分子であるため、その機能解析を十分に行うためにはターゲティングマウスを作成して、マウスの臓器の変異や造血系、免疫系の異常を調べるのが効果的であると考えた。そこでまずマウスM83のゲノムをマウス129SvJゲノムライブラリーから単離し解析を行った。解析の結果、M83のゲノムは13個のエクソンより構成され、機能的領域と考えられる細胞膜貫通領域および細胞内領域は各々10〜13番目のエクソン、13番目エクソンにコードされていることを解明した。このゲノム情報をもとにM83の10〜13番目のエクソンがネオマイシン耐性遺伝子で置き換わることにより細胞膜貫通領域及び細胞内領域を欠損できるようなターゲティングベクターの構築を完了させた。
M83の発現はRT-PCRによって骨髄中の非常に幼若な血液細胞である分化抗原(Lin)陰性Sca-1陽性c-kit陽性細胞から認められる。このことからM83のモノクローナル抗体を作成して、どの分化段階でM83の発現が開始されるかを詳細に調べ、なおかつ骨髄中のM83陽性細胞を単離してin vitroの培養で増殖能、分化能を詳細に調べ、血球細胞での機能を解明しようと考えた。本年度においてはラットの免疫に用いるM83細胞外領域とのFcキメラコンストラクトを構築し、蛋白の精製を試みた。